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miR-21对人胶质瘤细胞株SHG-44放射敏感性影响及其影响机制研究

作　者: 周冲
导　师: 周菊英
学　校: 苏州大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 胶质瘤辐射敏感性 miR-21 反义寡核苷酸细胞凋亡细胞周期
分类号: R739.41
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:观察miR-21在人脑胶质瘤细胞SHG-44及其辐射抗性模型中的表达差异,探讨敲低miR-21表达联合辐射对SHG-44辐射敏感性的影响,为以miR-21为靶点的分子靶向放疗增敏提供体外研究的理论及实验依据。方法:使用胶质瘤细胞株SHG-44,建立辐射抗性胶质瘤模型SHG-44抗,分别给予6 MV X射线单次照射0、1、2、4、6、8 Gy,多靶单击模型拟合细胞存活曲线,评估所构建模型的辐射抗性效果。使用Taqman探针实时荧光定量PCR法检测SHG-44及SHG-44抗细胞株中miR-21表达,Western Blot法检测信号转导子和转录激活子3蛋白表达(stat3)。使用脂质体介导采用瞬间转染法转染反义miR-21寡核苷酸(AS-miR-21)及阴性对照寡核苷酸于胶质瘤SHG-44细胞中。设空白对照组、阴性对照转染组及AS-miR-21转染组,成克隆实验计算放射增敏比(SER),绘制细胞存活曲线。流式细胞仪检测上述3组及联合单次6 Gy照射后细胞凋亡率、细胞周期变化。吖啶橙/溴乙啶染色法,在激光共聚焦显微镜下观察辐射联合组SHG-44细胞凋亡的形态学特征。结果:成功建立了SHG-44抗辐射抗性细胞株,集落形成实验显示SHG-44细胞D0=2.35、SF2=0.62 ,SHG-44抗细胞D0=3.22,SF2=0.74,两组SF2比较差异有统计学意义(t = 4.13,P < 0.05)。qRT-PCR及Western blot法检测SHG-44抗细胞的miR-21表达及stat3蛋白表达均较SHG-44升高。SHG-44细胞转染AS-miR-21组的D0、Dq及SF2值较空白对照组及阴性转染组降低,放射增敏比SERD0、SERDq分别为1.32、2.10。细胞周期分析示转染组较空白对照及阴性对照组的G0+G1期比例增高,S期比例降低且差异均具有统计学意义(P<0.05)。凋亡分析示照射组、miR-21转染组及联合组的早期凋亡率均高于对照组(P<0.05)。AO/EB染色可见联合组凋亡细胞核固缩、核碎裂,凋亡小体形成。结论:SHG-44为一高表达miR-21细胞株,且SHG-44照射后代细胞miR-21表达增高, stat3蛋白可能参与了miR-21表达的调节。抑制miR-21表达可增加SHG-44细胞放射敏感性,其机制可能与促进细胞凋亡及周期再分布有关。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-13
第一部分 SHG-44 细胞及其辐射抗性模型细胞stat3 及miR-21 表达差异  13-26
  实验材料试剂和仪器  13-15
  实验方法  15-19
  结果  19-22
  讨论  22-24
  参考文献  24-26
第二部分 miR-21 反义寡核苷酸对SHG-44 放射增敏的体外研究  26-38
  实验材料试剂和仪器  26-27
  实验方法  27-29
  结果  29-35
  讨论  35-37
  参考文献  37-38
全文小结  38-39
综述  39-46
攻读学位期间公开发表的论文  46-47
中英文缩略词表  47-48
致谢  48-49

miR-21对人胶质瘤细胞株SHG-44放射敏感性影响及其影响机制研究

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