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大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为视网膜光感受器样细胞的研究

作　者: 陈金国
导　师: 徐国兴
学　校: 福建医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 骨髓间充质干细胞光感受器细胞分离培养诱导分化
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:探讨体外分离培养视网膜光感受器细胞以及体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)诱导分化成视网膜光感受器样细胞的能力。方法:1、取SD大鼠眼球:①视网膜片行消化前后的HE染色。②分离光感受器细胞:形态学观察;视紫红质(Rhodopsin)免疫细胞化学染色行光感受器细胞的鉴定;同时收集光感受器细胞培养上清液。2、分离培养SD大鼠的骨髓间充质干细胞,取第三代rMSCs,采用光感受器细胞培养上清液诱导rMSC。诱导14d后采用免疫细胞化学染色和Rt-PCR观察rMSC视紫红质(Rhodopsin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果:视网膜片的HE染色,消化前观察到完整的九层,消化后光感受器细胞大量缺失,而其它层完整,光感受器细胞免疫细胞化学鉴定阳性率达95%以上。诱导细胞14d后镜下观察到神经样的细胞形态,免疫细胞化学:实验组rMSC的Rhodopsin表达率为35.1%±6.2%,而对照组中无Rhodopsin阳性的细胞;实验组rMSC的NSE表达率为33.6%±4.0%,对照组为10.6%±5.0%,组间差异具有统计学意义(F =0.09,P < 0.001);实验组rMSC的GFAP的表达率为9.6%±1.5%,对照组为:13.7%±3.0%,组间差异无统计学意义(F =1.726,P >0.05)。RT-PCR鉴定结果显示诱导组观察到Rhodopsin、NSE、GFAP表达,而对照组只有NSE、GFAP表达。结论:采用酶消化非离心的方法可以得到大量较纯且完整的光感受器细胞;体外培养的rMSC,经过视网膜光感受器细胞培养上清液诱导,可以分化为视网膜光感受器样细胞。

全文目录

缩略词表  4-5
中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
引言  7-10
材料和方法  10-23
结果  23-29
讨论  29-32
结论  32-33
参考文献  33-36
综述  36-42
致谢  42

大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为视网膜光感受器样细胞的研究

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