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酶解水牛乳蛋白制备降血压肽的研究

作　者: 李东平
导　师: 廖丹葵
学　校: 广西大学
专　业: 化学工艺
关键词: 水牛乳酶解降血压肽稳定性超滤
分类号: TS252.59
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

高血压是心血管疾病的一个重要的危险因素,但也是主要的可控危险因子。血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme, ACE)是调整血压的主要因素,抑制ACE的活性会降低血压。本文以水牛乳为原料制备降血压肽,并研究酶解液的热稳定性和酸碱稳定性。选用胃蛋白酶等6种蛋白酶酶解脱脂水牛乳,筛选出胃蛋白酶为试验最佳用酶。在此基础上,采用单因素和正交试验,考察了酶解时间、初始酶用量、初始底物浓度、酶解温度和pH值对酶解工艺的影响,得到最佳酶解工艺条件为：温度为39℃,时间为3h,pH为3.0,底物浓度为1.5%,加酶量为8000U-g-1。0.1mg·mL-1多肽浓度条件下,此时酶解产物的ACE抑制率为55.2%,水解度为17.4%。此时酶解液的ACE抑制率可达60.7%,水解度为15.8%。用胃肠道模拟试验和稳定性试验考察胃肠道酶、温度和pH对酶解液的ACE抑制活性稳定性的影响,结果表明：水牛乳蛋白胃蛋白酶酶解液具有良好的胃蛋白酶耐受性；在3≤pH≤8的环境下,水牛乳蛋白胃蛋白酶酶解液的ACE抑制活性具有良好的酸碱稳定性；在T≤60℃的环境下,水牛乳蛋白胃蛋白酶酶解液的ACE抑制活性具有良好的热稳定性。采用超滤技术分离和富集酶解液,结果显示：酶解液经10KDa和5KDa的超滤膜超滤后,分子量大于10kDa的肽分子物质基本被截留。分子量小于5kDa的肽分子物质经富集后,在第3组份中的含量提高到88.6%；超滤后,分子量为5-10KDa和小于5KDa的组份对ACE的抑制率依次升高,其中分子量小于5KDa的组份对ACE的抑制率最高为87.7%,较酶解液活性提高了1.45倍。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
符号说明  11-12
第一章绪论  12-21
  1.1 我国水牛乳产业的现状  12-13
  1.2 降血压肽的研究  13-19
    1.2.1 降血压肽的作用机制  13-14
    1.2.2 降血压肽的制备与分离  14
    1.2.3 降血压肽的检测  14-15
    1.2.4 乳源降血压肽的研究进展  15-17
    1.2.5 国内外降血压肽的研究进展  17-19
  1.3 研究课题简介  19-21
    1.3.1 研究的目的和意义  19-20
    1.3.2 本文主要工作  20-21
第二章水牛乳蛋白降血压肽的制备  21-30
  引言  21
  2.1 试剂与仪器  21-22
    2.1.1 试剂  21
    2.1.2 主要仪器  21-22
  2.2 方法  22-25
    2.2.1 水牛乳氨基酸分析  22-23
    2.2.2 脱脂水牛乳蛋白质含量的测量  23
    2.2.3 蛋白酶酶活的测定  23-24
    2.2.4 酶解液的制备  24
    2.2.5 多肽浓度的测量  24
    2.2.6 ACE体外活性检测  24-25
    2.2.7 蛋白酶的选择  25
  2.3 结果与讨论  25-29
    2.3.1 水牛乳氨基酸分析  25-26
    2.3.2 脱脂水牛乳的蛋白质含量  26
    2.3.3 酪氨酸标准曲线  26-27
    2.3.4 牛血清蛋白标准曲线  27-28
    2.3.5 蛋白酶的选择  28-29
  2.4 本章小结  29-30
第三章降血压肽酶解工艺条件的研究  30-38
  引言  30
  3.1 药品与仪器  30
    3.1.1 药品  30
    3.1.2 主要仪器  30
  3.2 方法  30-32
    3.2.1 单因素试验  30
    3.2.2 水解度的测量  30-32
    3.2.3 多肽浓度的测量  32
    3.2.4 ACE体外活性检测  32
    3.2.5 正交试验  32
  3.3 结果与讨论  32-36
    3.3.1 工艺条件的探索  32-35
    3.3.2 工艺条件的优化  35-36
  3.4 本章小结  36-38
第四章酶解液的ACE抑制活性稳定性的研究  38-44
  引言  38
  4.1 试剂与仪器  38-39
    4.1.1 试剂  38
    4.1.2 主要仪器  38-39
  4.2 方法  39-40
    4.2.1 酶解液胃肠道模拟试验  39
    4.2.2 多肽浓度的测量  39
    4.2.3 ACE体外活性检测  39
    4.2.4 温度与pH对酶解液ACE抑制活性稳定性的影响  39
    4.2.5 高效毛细管电泳分析  39-40
  4.3 结果与讨论  40-43
    4.3.1 酶解液对胃肠道酶的耐受性  40
    4.3.2 不同胃肠道模拟实验后的酶解液的高效毛细管电泳分析  40-42
    4.3.3 pH对酶解液ACE抑制活性稳定性的影响  42
    4.3.5 温度对酶解液ACE抑制活性稳定性的影响  42-43
  4.4 本章小结  43-44
第五章酶解产物的初步分离和富集  44-53
  引言  44
  5.1 试剂与仪器  44-45
    5.1.1 主要试剂  44
    5.1.2 主要仪器  44-45
  5.2 方法  45-47
    5.2.1 酶解液超滤条件的研究  45
    5.2.2 酶解液的超滤  45
    5.2.3 多肽浓度的测量  45
    5.2.4 ACE体外活性检测  45
    5.2.5 多肽的回收率  45
    5.2.6 平均膜通量  45-46
    5.2.7 膜的清洗  46
    5.2.8 超滤组份分子量的测量  46-47
  5.3 结果与讨论  47-52
    5.3.1 超滤条件的研究  47-49
    5.3.2 超滤液分子量的测定  49-52
    5.3.3 不同超滤组份的ACE抑制率  52
  5.4 本章小结  52-53
第六章结论与展望  53-55
  6.1 结论  53-54
  6.2 展望  54-55
参考文献  55-62
致谢  62-63
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酶解水牛乳蛋白制备降血压肽的研究

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