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自噬激动剂雷帕霉素对伤寒沙门菌质粒与巨噬细胞相互作用的影响

作　者: 李琼
导　师: 黄瑞；吴淑燕
学　校: 苏州大学
专　业: 病原生物学
关键词: 雷帕霉素 伤寒沙门菌 质粒 巨噬细胞 自噬 凋亡
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:研究自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)对伤寒沙门菌质粒pRST98与巨噬细胞相互作用的影响,为探讨自噬和pRST98在沙门菌致病中的作用机制提供理论和实验依据。方法:以携带pRST98的伤寒沙门菌ST8,无质粒的伤寒沙门菌ST10作受试菌,携带一分子量为100 Kb毒力质粒的鼠伤寒沙门菌标准毒株SR-11作阳性对照。用Giemsa染色法和系列稀释法测定RAPA的最适工作浓度;分别用加入和未加入RAPA的RPMI 1640培养小鼠腹腔巨噬细胞J774A.1过夜后,与受试菌共作用,于0点、2、4、8、12和24 h用Western blot检测自噬蛋白Beclin-1的表达;PI染色后流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡sub-G1峰;透射电镜观察J774A.1细胞超微结构的改变。结果:RAPA最适工作浓度为25μg/ml;Beclin-1表达量在2 h时SR-11组<ST8组<ST10组,RAPA干预后0点即表现出以上规律;细胞凋亡sub-G1峰显示SR-11组>ST8组>ST10组,RAPA干预后ST8组、SR-11组凋亡率下降,而ST10组凋亡率升高(P < 0.05);电镜下2～4 h可见部分细菌被双层膜包裹,12 h可见凋亡改变,RAPA干预后,ST8组细胞破坏减轻,而ST10组加重。结论:上述结果表明伤寒沙门菌质粒pRST98与细胞自噬有关,在早期可抑制自噬,其诱导的巨噬细胞凋亡可被自噬激动剂RAPA减轻,而RAPA能使不携带pRST98的伤寒沙门菌诱导的巨噬细胞凋亡增强。

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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