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海南槟榔种质遗传多样性与槟榔黄化病发生关系研究

作　者: 刘慧娟
导　师: 罗大全
学　校: 海南大学
专　业: 森林保护学
关键词: 槟榔 RAPD分析槟榔黄化病遗传多样性
分类号: S763.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本研究对槟榔基因组DNA的提取方法进行了改良,优化了槟榔RAPD反应体系,建立了最佳RAPD扩增体系,对收集的海南槟榔种质资源进行了遗传多样性分析,以图揭示海南槟榔遗传多样性与槟榔黄化病的发生传播关系。研究结果如下：1.建立了槟榔RAPD反应分析体系。25μL RAPD反应体系内含1×PCR缓冲液,1μmol/L引物,2.0mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTPs, 1UTaqDNA聚合酶,50ng模板DNA。RAPD扩增程序为：94℃预变性240s,94℃变性45s,34℃退火60s,72℃延伸90s,循环40次,72℃充分延伸10 min。2.从80条RAPD引物中筛选出10条引物对样品进行了RAPD分析。共扩增出101条条带,扩增出的片段一般在600bp-3000bp之间；其中多态性条带为78条,槟榔间的多态性为77%。3.对海南20个槟榔主要种植县市的样品74份样品进行聚类分析结果表明,同一地区采集的槟榔样品间的相似系数集中在0.93左右,说明海南槟榔个体之间的基因型是不一致的,具有一定的多态性的,无纯合的群体存在；同一地区的槟榔个体间的亲缘关系都较近,但是个体间的遗传多样性比较丰富；不同地区的槟榔相似系数在0.93以下,个体差异明显。4.对海南、云南、印度、柬埔寨槟榔样品和三药槟榔样品进行聚类分析结果表明,三药槟榔与槟榔相似系数为0.38,说明三药槟榔与槟榔间的亲缘关系较远；在相似系数为0.78左右槟榔群体被分为两类,第一类中包括云南Ⅰ与海南Ⅰ、印度、柬埔寨样品,其中云南Ⅰ与海南Ⅰ亲缘关系较近,印度、柬埔寨样品亲缘关系较近；第二类包括云南Ⅱ、海南Ⅱ样品,其相似系数为0.8左右。5.对海南病区与非病区群体聚类分析结果表明,在相似系数为0.79时槟榔可以分为两大类。两种类型均有非病区样品分布,但是两种类型中的槟榔群体,在发病时间和发病程度上存在一定的差异。第一类型槟榔群体发病较重、较早；第二类型中非病区槟榔群体较多。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
目录  7-10
1 绪论  10-23
  1.1 槟榔  10-14
    1.1.1 槟榔的形态学、生态学特征及种植现状植物学特征  10-11
      1.1.1.1 槟榔的形态学特征  10
      1.1.1.2 槟榔的生物学特性  10-11
      1.1.1.3 槟榔的种植现状  11
    1.1.2 槟榔的利用  11-13
      1.1.2.1 历史上槟榔的利用  11-12
      1.1.2.2 现在槟榔的利用  12-13
    1.1.3 槟榔的研究  13-14
  1.2 槟榔黄化病  14-17
    1.2.1 植原体的检测  15-17
  1.3 遗传标记及其研究方法  17-21
    1.3.1 形态学标记  17
    1.3.2 细胞遗传标记  17-18
    1.3.3 生物化学标记  18
    1.3.4 分子标记  18-21
      1.3.4.1 DNA分子标记特点  18-19
      1.3.4.2 DNA分子标记技术种类  19
      1.3.4.3 RAPD技术主要特点及其研究的主要植物种类  19-21
  1.4 本研究的目的意义和研究内容  21-23
    1.4.1 目的意义  21-22
    1.4.2 研究内容  22-23
2 槟榔DNA的提取和RAPD体系的建立  23-37
  2.1 研究材料  23
  2.2 仪器和药品  23-24
    2.2.1 仪器  23-24
    2.2.2 药品  24
  2.3 方法  24-29
    2.3.1 DNA提取方法  24-26
      2.3.1.1 CTAB法(Tai and Tanksey,1990)  24-25
      2.3.1.2 改良CTAB法(陆叶等,2009)  25-26
      2.3.1.3 高盐低pH法(郝朝运等,2006)  26
    2.3.2 RAPD体系的建立  26-27
      2.3.2.1 RAPD引物筛选  26-27
      2.3.2.2 RAPD实验体系的优化  27
    2.3.3 DNA的检测  27-29
      2.3.3.1 总DNA的检测  27-28
      2.3.3.2 RAPD扩增产物的检测  28-29
  2.4 结果与分析  29-35
    2.4.1 DNA提取结果  29-30
    2.4.2 槟榔RAPD引物的筛选  30
    2.4.3 槟榔RAPD反应体系的优化  30-35
      2.4.3.1 退火温度优化  30-31
      2.4.3.2 引物浓度优化  31-32
      2.4.3.3 TaqDNA聚合酶用量  32
      2.4.3.4 dNTPs浓度优化  32-33
      2.4.3.5 Mg~(2+)浓度优化  33-34
      2.4.3.6 模板DNA的用量  34-35
  2.5 优化后的槟榔RAPD分析体系及其验证  35-36
  2.6 讨论  36-37
3 海南槟榔的RAPD分析  37-51
  3.1 研究材料  39
  3.2 仪器和药品  39
  3.3 方法  39-40
    3.3.1 RAPD分析体系与方法  39
    3.3.2 RAPD扩增产物的检测  39
    3.3.3 RAPD数据分析  39-40
  3.4 结果与分析  40-49
    3.4.1 DNA提取结果  40-41
    3.4.2 RAPD结果的多态性分析  41-45
    3.4.4 以样品为单位对海南槟榔RAPD结果进行初步分析  45-46
    3.4.5 以群体为单位对RAPD扩增结果进行分析  46-49
      3.4.5.1 群体相似系数  46
      3.4.5.2 群体聚类分析  46-49
  3.5 讨论  49-51
结论  51
研究展望  51-52
参考文献  52-59
发表相关的论文  59-60
致谢  60-61
附图  61-63

海南槟榔种质遗传多样性与槟榔黄化病发生关系研究

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