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废蚕丝中主要成份提纯及丝素降胆固醇肽的酶法制备研究

作　者: 蓝建京
导　师: 廖丹葵
学　校: 广西大学
专　业: 化学工艺
关键词: 丝素蛋白降胆固醇肽抑制率碱性蛋白酶酶解动力学模型
分类号: TQ936.16
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

丝素蛋白是一种优质的蛋白源,在酶的催化作用蛋白可水解生成胨、肽等低分子量产物。本实验研究了丝胶蛋白、丝素蛋白的提取方法及丝素降胆固醇肽的制备,具体研究内容如下：通过对氯化镁、氯化钙、氯化锌三种盐溶液对丝素溶解进行比较,得出氯化钙溶液是溶解丝素的最佳溶剂,其溶解丝素的最佳工艺条件为：最佳浓度为40%,溶解温度为90℃,固液比为1：50(m/V),氯化钙溶液的pH值可以不加考虑。通过对透析法、酸析法和冰冻法提取丝胶的效果的比较,得出冰冻法是提取丝胶的较好的方法,其最佳的提取条件是：pH=4,温度-20℃,冰冻时间为13h,丝胶液浓度为32.8%。以提纯后的丝素蛋白为原料,采用蛋白酶酶解法制备丝素降胆固醇肽,考察了丝素活性肽在不同水解时间对胆固醇溶解度的抑制率,确定了水解度为16.5%时,产物具有最佳活性。并以此做为碱性蛋白酶水解蚕丝蛋白制取降胆固醇活性肽的评价指标,并对其水解工艺条件进行优化,其最佳条件为：底物浓度为20g/L,酶用量为0.4g/L,反应温度为40℃,pH值为9.5。通过对酶促水解反应过程研究,并根据实验结果和经验公式推导,可控酶解动力学方程为:r=(9.3529Eo+0.3444So)exp[-0.2417(DH)], DH=4.1382In[1-(0.2601Eo/So+0.0832)t]。对推导出的模型准确性进行试验验证,结果显示在一定的范围内可以表征碱性蛋白酶-丝素蛋白的反应规律。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
目录  8-10
第一章文献综述  10-18
  1.1 生物功能活性肽  10-12
    1.1.1 生物活性肽的分类及来源  10
    1.1.2 生物活性肽的生理功能  10-11
    1.1.3 生物活性肽的研究进展  11-12
  1.2 高胆固醇对人体的危害及降胆固醇肽的研究进展  12-13
    1.2.1 高胆固醇血症的危害  12-13
    1.2.2 降胆固醇肽的研究进展  13
  1.3 功能活性肽酶法制备的研究及其发展趋势  13-14
  1.4 废蚕丝研究目的、意义及丝素蛋白的研究进展  14-17
    1.4.1 废蚕丝研究目的及意义  14-15
    1.4.2 丝素蛋白研究进展  15-17
  1.5 本课题研究内容  17-18
第二章可溶性丝素蛋白的制备工艺研究  18-23
  2.1 实验的试剂与仪器  18
    2.1.1 实验药品  18
    2.1.2 实验仪器  18
  2.2 实验的方法  18-19
    2.2.1 可溶性丝素蛋白粉的制备工艺  18-19
    2.2.2 不同盐类对丝素的溶解作用  19
    2.2.3 氯化钙溶解丝素的工艺条件优化  19
  2.3 结果与分析  19-22
    2.3.1 不同盐类对丝素的溶解效果  19-20
    2.3.2 氯化钙对丝素溶解的工艺条件的优化  20-22
  2.4 结论  22-23
第三章丝胶的提取工艺研究  23-30
  3.1 实验材料和仪器  23-24
    3.1.1 实验材料  23
    3.1.2 实验仪器  23-24
  3.2 实验方法  24-25
    3.2.1 蚕丝所含水分的测定方法  24
    3.2.2 脱胶效果的检验  24
    3.2.3 丝胶提取液的制备  24
    3.2.4 丝胶提取的方法  24-25
    3.2.5 单因素法冰冻法提取丝胶的方法优化  25
  3.3 结果与分析  25-29
    3.3.1 蚕丝所含水分的测定  25
    3.3.2 三种提取丝胶方法效果分析及其蛋白质含量的分析--  25-27
    3.3.4 冰冻法提取丝胶的方法优化的结果分析  27-29
  3.4 结论  29-30
第四章丝素活性肽降胆固醇肽的制备及其酶解工艺条件的优化  30-37
  4.1 实验材料和仪器  30-31
    4.1.1 实验材料  30
    4.1.2 实验仪器  30-31
  4.2 实验方法  31-32
    4.2.1 丝素活性肽的制备  31
    4.2.2 水解度的计算  31-32
    4.2.3 不同水解度的丝素肽对胆固醇胶束溶解度抑制率的测定  32
    4.2.4 酶解工艺条件的优化  32
  4.3 结果与分析  32-36
    4.3.1 丝素蛋白水解度与胆固醇抑制率的关系  32-33
    4.3.2 酶法水解丝素蛋白最佳工艺条件的确定  33-36
  4.4 结论  36-37
第五章蛋白酶水解丝素蛋白的动力学研究  37-45
  5.1 实验材料、药品及仪器  37-38
    5.1.1 实验材料与药品  37
    5.1.2 实验仪器  37-38
  5.2 碱性蛋白酶活力值的测定  38-39
    5.2.1 碱性蛋白酶活力值的测定方法  38
    5.2.2 碱性蛋白酶的酶活力的计算  38-39
  5.3 碱性蛋白酶水解丝素蛋白动力学模型的建立  39-44
    5.3.1 蛋白质限制性酶解过程的动力学模型的推导过程  39-41
    5.3.2 碱性蛋白酶水解丝素蛋白动力学参数的确定  41-43
    5.3.3 丝素蛋白酶解动力学模型的验证  43-44
  5.4 结论  44-45
结论与展望  45-47
参考文献  47-51
致谢  51-52
攻读学位期间发表论文情况  52

废蚕丝中主要成份提纯及丝素降胆固醇肽的酶法制备研究

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