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牛奶中蛋白质和17种β-兴奋剂的分析方法研究

作　者: 王娟
导　师: 王志华
学　校: 北京化工大学
专　业: 化学
关键词: 牛奶蛋白质 β-兴奋剂高效液相色谱高效液相色谱串联质谱
分类号: TS252.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

牛奶营养丰富,是人们日常生活中不可缺少的饮品,牛奶质量和食用安全一直备受关注,牛奶质量问题主要来源于两方面,一是非蛋白氮的非法添加,二是奶牛食用饲料中添加的兽药或者药用兽药残留引起的。因此,研究建立方法测定牛奶中蛋白质的含量,及检测兽药残留量具有重要意义。本文建立了测定牛奶蛋白质的反相高效液相色谱分析方法,对前处理方法进行了优化,采用Agilent Zorbax 300SB-C8 (250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,三氟乙酸-水-乙腈做为流动相,梯度洗脱,紫外检测器,214nm单波长检测,柱温45℃,外标法定量。测定κ-CN、αs2-CN、αs1-CN、βCN和Whey的线性关系良好,相关系数均大于0.999,加标回收率在74.8%-132.5%之间。另外,该方法可以分离大豆的植物蛋白质和牛奶中主要蛋白质,因此,可作为牛奶中添加植物蛋白质的检测方法。采用本方法分析了9种牛奶样品蛋白质的含量,结果表明,本方法测定结果准确可靠。不同样品中4种酪蛋白与乳清蛋白的比.例基本接近,但是不同品牌之间存在一定差异。本文建立了高效液相色谱串联质谱法同时检测牛奶中17种β-兴奋剂。牛奶样品前处理过程采用3%的三氯乙酸水溶液沉淀蛋白质,4℃,5000rpm离心去脂,取上层清液,经Waters Oasis MCX固相萃取柱净化,洗脱液经氮气吹干,然后用流动相复溶,过滤。采用Waters XBridge TM Shield RP18 (50 mm×2.1mm,2.5 pm)色谱柱,以0.1%甲酸溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱,进行液相色谱分离,最终采用电喷雾串联四极杆质谱进行检测。结果表明,除氧烯洛尔(12.33-493.20 ng·mL-1)外,其余16种药物在0.37-24.40 ng·mL-1范围内,线性关系良好,相关系数均大于0.997。3个水平添加,样品的平均加标回收率为61.6%-115.7%。17种药物的方法检出限为0.024-3.96 ng·g-1,方法定量限为0.354-13.20ng·g-1。实验结果表明,该方法简单,快速,灵敏度高,确证能力强,可满足牛奶食品中β-兴奋剂药物的残留分析。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-14
第一章绪论  14-27
  1.1 牛奶蛋白质和β-兴奋剂概述  14-17
    1.1.1 牛奶主要蛋白质概述  14
    1.1.2 β-兴奋剂概述  14-17
  1.2 牛奶蛋白质的主要分析方法  17-19
    1.2.1 凯氏定氮法  17-18
    1.2.2 毛细管电泳法(CE)  18
    1.2.3 液相色谱法(LC)  18-19
    1.2.4 Sprint CEM仪测定法  19
  1.3 兴奋剂残留的分析方法  19-21
    1.3.1 高效液相色谱法(HPLC)  19-20
    1.3.2 气相色谱质谱法(GC-MS)  20
    1.3.3 液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)  20-21
  1.4 样品的提取和净化  21-25
    1.4.1 液-液萃取(LLE)  22
    1.4.2 固相萃取(SPE)  22-25
    1.4.3 免疫亲和色谱法(IAC)  25
  1.5 本论文的研究目的、意义及研究内容  25-27
    1.5.1 论文的研究目的和意义  25-26
    1.5.2 论文的研究内容  26-27
第二章牛奶中的主要蛋白质的测定  27-37
  2.1 实验部分  27-29
    2.1.1 主仪器  27
    2.1.2 主要试剂  27-28
    2.1.3 溶液的配制  28
    2.1.4 牛奶样品前处理方法  28
    2.1.5 色谱测定条件  28-29
  2.2 结果与讨论  29-37
    2.2.1 样品前处理条件优化  29
    2.2.2 色谱分离条件的优化  29-32
    2.2.3 工作曲线  32-33
    2.2.4 方法回收率  33
    2.2.5 方法的重复性和重现性  33-34
    2.2.6 实际牛奶样品分析  34-36
    2.2.7 结论  36-37
第三章牛奶中17种β-兴奋剂的检测方法  37-54
  3.1 实验部分  37-42
    3.1.1 主要试剂  37-38
    3.1.2 主要仪器  38
    3.1.3 溶液的配制  38-40
    3.1.4 牛奶样品前处理方法  40
    3.1.5 色谱条件  40-41
    3.1.6 质谱条件  41-42
  3.2 结果与讨论  42-54
    3.2.1 样品前处理方法优化  42-45
    3.2.2 分离测定条件优化  45-49
    3.2.3 基质效应  49-51
    3.2.4 方法线性范围、检出限和定量限  51-52
    3.2.5 方法回收率和精密度  52-53
    3.2.6 实际牛奶样品的检测  53
    3.2.7 结论  53-54
第四章结论  54-55
参考文献  55-60
致谢  60-61
攻读学位期间发表及接收的学术论文  61-62
作者简介  62
导师简介  62

牛奶中蛋白质和17种β-兴奋剂的分析方法研究

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