学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

荧光蛋白快速监控臭氧与混合细菌作用过程机理的研究

作　者: 冯倩
导　师: 赵会英；邢新会
学　校: 北京化工大学
专　业: 轻工技术与工程
关键词: 臭氧枯草芽孢杆菌大肠杆菌恶臭假单胞菌荧光蛋白混合细菌机理
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 66次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

臭氧是一种强氧化剂,广泛用于消毒,灭菌,污水处理及污泥减量化等领域。传统的表征臭氧与细菌的作用过程机理的方法尚存在检测方法操作耗时,数据误差大等问题,对不同细菌对臭氧敏感性的比较研究较少,并且传统的检测方法无法对混合细菌与臭氧作用过程复杂性进行快速检测。荧光蛋白作为可视化的标记蛋白广泛应用于定量表征蛋白表达以及细胞浓度等,具有分析检测快速方便,表征准确的优点。本研究利用基因工程手段将三种不同颜色的荧光蛋白基因在不同细菌中获得表达,通过追踪胞内荧光蛋白含量的变化建立解析臭氧与细菌作用过程机理的新方法。使用的菌株包括革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌和恶臭假单胞菌。细胞生存活性结果表明对臭氧的耐受性：枯草芽孢杆菌>恶臭假单胞菌>大肠杆菌,荧光蛋白追踪显示在相对最低的臭氧添加量时大肠杆菌胞内物质大量泄露,受到破坏,枯草芽孢杆菌和恶臭假单胞菌剂量较高时才被大量破坏。人工构建的混合菌群与臭氧作用的分析结果表明,细菌之间表现出一定的保护作用,使得细菌胞内物质泄漏推迟,需要较高的臭氧浓度,细胞对臭氧的耐受性增强。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-14
第一章绪论  14-31
  1.1 臭氧  14-20
    1.1.1 臭氧的发现与性质  14
    1.1.2 臭氧的制备  14-15
    1.1.3 臭氧的应用  15-20
      1.1.3.1 水的消毒,污水处理及脱色除臭  16-17
      1.1.3.2 剩余污泥减量化处理  17-18
      1.1.3.3 提高水产养殖活体的生长速率及养殖池水净化  18
      1.1.3.4 空气,食品加工过程与医疗系统消毒杀菌  18-20
  1.2 臭氧杀菌及污泥减量化过程机理及关键问题  20-22
    1.2.1 臭氧杀菌作用过程机理及问题  20-21
    1.2.2 臭氧污泥减量化过程机理及问题  21-22
  1.3 荧光蛋白简介  22-30
    1.3.1 荧光蛋白的发现  22-24
    1.3.2 荧光蛋白发光特性与机制  24-26
    1.3.3 荧光蛋白的结构  26-27
    1.3.4 荧光蛋白特点  27-28
    1.3.5 荧光蛋白的应用  28-30
      1.3.5.1 报告基因和细胞标记  28-29
      1.3.5.2 研究活细胞的蛋白变动过程,细胞器动力学和内膜运输  29
      1.3.5.3 荧光蛋白在生物防治中的应用  29-30
      1.3.5.4 荧光蛋白在微生物学中的应用  30
  1.4 本论文研究内容及拟解决问题  30-31
第二章荧光蛋白用于微生物定量检测的研究  31-39
  2.1 引言  31
  2.2 荧光蛋白的定量方法研究  31-32
  2.3 混合荧光蛋白体系不同荧光蛋白的定量  32-38
    2.3.1 材料与方法  32-33
    2.3.2 结果与讨论  33-38
  2.4 本章小结  38-39
第三章荧光蛋白解析臭氧与单种细菌作用过程  39-69
  3.1 引言  39
  3.2 材料与方法  39-48
    3.2.1 质粒与菌株  39-45
      3.2.1.1 绿色荧光蛋白质粒及表达菌株  39-42
      3.2.1.2 红色荧光蛋白质粒及表达菌株  42-44
      3.2.1.3 青色荧光蛋白质粒及表达菌株  44-45
    3.2.4 检测方法  45-48
      3.2.4.1 臭氧浓度检测及臭氧剂量计算方法  45-46
      3.2.4.2 细胞生存活性检测  46
      3.2.4.3 细胞状态检测  46
      3.2.4.4 细胞呼吸速率检测  46-47
      3.2.4.5 细菌与臭氧作用过程荧光蛋白追踪  47
      3.2.4.6 细菌与臭氧作用过程总蛋白的追踪  47
      3.2.4.7 细菌与臭氧作用过程泄露总氮检测  47-48
      3.2.4.8 细菌超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性检测  48
  3.3 实验结果与讨论  48-68
    3.3.1 三种荧光蛋白在三种细菌中的表达  48-53
    3.3.2 细菌与臭氧反应体系的搭建  53-55
    3.3.3 臭氧化过程对细菌生存活性和细胞状态的影响  55-58
    3.3.4 臭氧对细胞破坏作用及代谢活性影响  58-63
    3.3.5 臭氧与细菌作用过程的蛋白追踪  63-67
    3.3.6 细菌敏感性差异分析  67-68
  3.4 本章小结  68-69
第四章荧光蛋白解析臭氧与混合细菌作用过程  69-80
  4.1 引言  69
  4.2 材料与方法  69-72
    4.2.1 细菌、质粒及培养方法  69-70
      4.2.1.1 红色荧光蛋白表达菌株  69-70
      4.2.1.2 青色荧光蛋白表达菌株  70
      4.2.1.3 绿色荧光蛋白表达菌株  70
    4.2.2 混合菌群的人工构建  70-71
    4.2.3 混合体系荧光蛋白的定量表征方法  71-72
    4.2.4 检测方法  72
  4.3 结果与讨论  72-79
    4.3.1 混合体系荧光蛋白的定量  72-74
    4.3.2 两种混合细菌与臭氧作用过程荧光蛋白的追踪  74-77
      4.3.2.1 两种表达荧光蛋白的细菌混合与臭氧作用  74-75
      4.3.2.2 表达荧光蛋白的细菌与无荧光细菌混合与臭氧作用  75-77
    4.3.3 三种混合细菌与臭氧作用过程荧光蛋白的追踪  77-79
  4.4 本章小结  79-80
第五章结论  80-81
参考文献  81-86
致谢  86-87
研究成果及近期发表的学术论文  87-88
作者和指导老师简介  88-89
北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书  89-90

荧光蛋白快速监控臭氧与混合细菌作用过程机理的研究

内容摘要

全文目录

相似论文