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芽孢益生菌B.lincheniformis Tu-1发酵条件优化、菌剂储存特性及应用研究

作　者: 柴玉龙
导　师: 朱宝成
学　校: 河北农业大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 地衣芽孢杆菌菌剂发酵条件优化肠道菌群酶活
分类号: S852.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本实验室已从獭兔的粪便中筛选出具有防治腹泻和提高饲料利用率等益生特性的地衣芽孢杆菌（B.lincheniformis）Tu-1菌株。本研究对其进行摇瓶发酵条件优化，在中试中获得高活菌（芽孢）含量的Tu-1菌剂，并研究Tu-1菌剂的存储特性，通过饲喂试验证明该菌剂具有改善獭兔肠道微生态环境、提高肠道消化酶活力和降低粪便营养成分含量等作用，为进一步研究其益生特性和作用机理提供了参考。具体研究结果如下：1、通过单因素试验及正交试验方法，确定了地衣芽孢杆菌（B.lincheniformis）Tu-1菌株的最优培养基与最佳培养条件为：玉米粉1.0%、酵母粉1.5%、MnSO4·H2O0.07%、Na₂HPO₄0.4%、NaH₂PO₄0.2%、起始pH为7.5、接种量为4.0%，装瓶量50mL（250mL三角瓶），摇床转速为200r·min^-1，在37℃培养48h,优化后芽孢形成率达到91.05%，最终生物量为5.15×10⁹CFU·mL^-1。2、通过对地衣芽孢杆菌Tu-1进行2吨规模中试发酵液菌浓达到5.89×109CFU·mL^-1以上；芽孢产率达90%以上；发酵液经离心后，菌泥活菌含量＞50×109CFU·mL^-1，喷雾干燥菌粉活菌（芽孢）含量＞100×10⁹CFU·g^-1，最后加辅料可配制成1.0×10¹⁰CFU·g-1的固体制剂。3、通过菌剂储存试验表明，芽孢杆菌Tu-1菌剂含水量应低于8.0%，保存在室温、密封、避光干燥处，24个月后，芽孢存活率仍可达到85%以上。4、通过獭兔饲喂试验表明，饲料中添加0.1%的Tu-1菌剂能提高肠道内有益菌群的数量，降低有害菌数量。粪便中乳酸菌、双歧杆菌及芽孢杆菌的数量分别比对照组增加了27.36%、25.76%和26.12%，大肠杆菌数减少了27.77%。试验组獭兔粪便中中性蛋白酶、α-淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶平均活力（试验开始第7d至第45d的平均酶活力）比对照组分别增加了9.20%、18.52%、36.91%和32.18%。试验组獭兔粪便中粗蛋白、淀粉、粗纤维素和粗脂肪含量比对照组分别减少了18.93%、38.72%、28.44%和26.50%，无机营养成分和水分含量没有太大变化。试验组料重比比对照组降低了16.18%。试验组腹泻率比对照组降低了28.57%。Tu-1菌剂具有调节獭兔肠道微生态，防治腹泻，提高饲料转化率的作用。

芽孢益生菌B.lincheniformis Tu-1发酵条件优化、菌剂储存特性及应用研究

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