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水痘—带状疱疹病毒基因型分析和gE糖蛋白的研究

作　者: 江龙凤
导　师: 王明丽
学　校: 安徽医科大学
专　业: 微生物学
关键词: 水痘-带状疱疹病毒基因型 gE糖蛋白突变原核表达
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的研究我国不同地区水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus, VZV)的基因型分布,明确不同地区流行的VZV病毒株的主要基因型及其与国外不同地区基因型的差异,分析代表性病毒株gE糖蛋白的基因序列,了解病毒的进化状态以及抗原表位发生变异的情况。初步开展VZV gE糖蛋白胞外域结构(氨基酸1-539)的克隆及原核表达,构建gE糖蛋白特异性免疫原性的融合表达载体,进行原核表达。方法2007.7-2008.7期间在合肥分离到的44株VZV病毒株,以及2010.12～2011.6期间分别从长春、北京、西安、乌鲁木齐、拉萨、广州和上海7个城市的三甲医院皮肤科收集水痘和带状疱疹患者的疱疹液拭子和皮肤痂片318份,样本数总计为362份。首先,采用聚合酶链反应(PCR)方法筛选阳性样本。其次,对ORFs1、6、12、16、17、21、22、35、37、50、54、55、56、60和66的PCR产物进行测序,用单个核苷酸多态性(SNP)谱的方法分析确定病毒株的基因型。然后,PCR扩增gE基因的全长片段,并进行测序分析。最后,构建v-Oka病毒株gE糖蛋白的表达载体以及在大肠杆菌中进行原核表达。结果经PCR检测,362份样本中VZV DNA的阳性标本为348份,阳性率为96.1%。SNP分析显示348株病毒株的基因型分为4种,其中有313株属于clade2遗传支(89.9%),22株为clade5遗传支(6.32%),5株属于clade3遗传支(1.44%),1株属于cladel遗传支(0.29%)。另有7株病毒(2.01%)兼有不同遗传支的特征,按照目前国际通用的分型方法不能归属于任何明确的遗传支。选择代表各不同遗传支的病毒株,进行gE基因序列分析,除了发现3个国外已有报道的1个同义突变(T660C)和2个反义突变(C119T,C1606A),还发现了3个新的反义突变(C56T、C1109T、C917A)和4个同义突变(C54T、T1075C、T816C、G279A)。成功构建pET28-gE(1～539aa)重组表达质粒,并能够在大肠杆菌中表达59kDa大小的重组蛋白。结论我国VZV病毒株的遗传呈现高度多样性,虽然89.9%的病毒株为clade2遗传支,但首次在我国新疆地区发现了clade5遗传支的VZV,在长春市和西安市还发现了目前尚未能分型的7株病毒。对18株病毒株gE基因序列分析,在gE的e1和c1抗原表位的编码区内中检出1个新型反义突变(C917A),需要进一步研究该突变对该毒株免疫原性和致病性的影响。成功构建pET28-gE(1～539aa)重组表达质粒并原核表达,有助于构建并表达gE融合重组蛋白,为研发VZV亚单位疫苗打下基础。

全文目录

缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
引言  10-15
材料及方法  15-23
结果  23-35
讨论  35-41
结论  41-42
参考文献  42-48
附录一：患者信息调查表  48-49
附录二：PET28-GE(1～539AA)重组质粒序列  49-50
附录三：个人简历  50-52
附录四：致谢  52-53
综述  53-66
  参考文献  63-66

水痘—带状疱疹病毒基因型分析和gE糖蛋白的研究

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