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CD11c^intCD45RB^hiDCreg及一群新型IL-10分泌型巨噬细胞的体内外鉴定

作　者: 王小茜
导　师: 石艳春
学　校:
专　业: 免疫学
关键词: 调节性树突状细胞 CD4~+CD25-T细胞凋亡炎症性肠病脾脏内皮基质细胞 IL-10 巨噬细胞
分类号: Q421
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的通过体内和体外两种鉴定方法探讨体内诱导的一群CD11cintCD45RBhiDCreg的部分生物学特性、功能及其可能的机制，同时和传统的成熟树突状细胞进行对比；另外，通过体外鉴定的方法研究了骨髓单个核细胞在脾脏内皮基质细胞提供的微环境中所分化出的细胞的特性及部分功能。方法调节性树突状细胞的体外鉴定主要是通过与同源CD4~+CD25-T细胞和固有免疫细胞分别共培养，观察调节性树突状细胞和成熟树突状细胞对T细胞和固有免疫细胞分别有什么影响并探讨其可能机制。首先，观察了两群树突状细胞对T细胞分化、增殖、凋亡的影响，比较了两群树突状细胞诱导Treg细胞的能力；其次，探讨了调节性树突状细胞影响T细胞的可能机制，比较了两群树突状细胞中IL-10、精氨酸酶-1、iNOS、活性氧、PD-L1、PD-L2、FasL的表达，分析了特异阻断高表达分子功能对调节性树突状细胞效应的逆转作用；最后用两群树突状细胞分别与体内外诱导的巨噬细胞共培养，观察调节性树突状细胞对巨噬细胞分泌炎性因子的影响，并试图探讨了影响机制。调节性树突状细胞的体内鉴定主要是观察了这群细胞对小鼠炎症性肠病的影响，结肠炎模型主要是通过给CB-17SCID小鼠尾静脉注射CD4~+CD25-T细胞和给C57BL/6J小鼠喂5%DSS水建立的。尾静脉注射T细胞的同一天也注射调节性树突状细胞，观察一个月的体重和粪便变化情况，最后检测结肠病理、长度、肠系膜淋巴结分泌细胞因子等指标；DSS模型主要观察生存率。此外，体外鉴定了脾脏内皮基质细胞和骨髓单个核细胞共培养14天后所分化的细胞，通过吉姆萨染色、表面标志检测和吞噬实验等鉴定了细胞生物学特性，同时通过酶联免疫吸附试验检测了在LPS刺激前后分泌细胞因子的情况；机制分析中比较了Transwell培养皿分隔培养和混合培养的区别以及共培养7天时的细胞形态；最后对分化细胞的功能进行了简单探讨，观察了分化细胞对同源CD4~+CD25-T细胞增殖和凋亡的影响。结果体内诱导的这群调节性树突状细胞具有一定促进Treg产生的能力；对T细胞增殖有微弱的抑制作用；但促进活化T细胞凋亡，并且这种凋亡可以用FasL中和抗体逆转；抑制固有免疫细胞产生炎性因子；可以预防炎症性肠病，延缓发病，减轻症状，提高生存率。脾脏内皮基质细胞和骨髓单个核细胞共培养14天后分化出一群高分泌IL-10、低分泌IL-12的巨噬细胞，这群巨噬细胞可以促进活化CD4~+T细胞晚期凋亡，抑制CD4~+T细胞的增殖。结论体内诱导的调节性树突状细胞可以负向调控T细胞和固有免疫细胞，在预防炎症性肠病上具有重要意义；建立了一种诱导高分泌IL-10的新型巨噬细胞的方法。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
前言  8-11
第一部分 CD11c~intCD45RB~hiDCreg 的鉴定  11-46
  第一章 CD11~cintCD45RB~hiDCreg 的体外鉴定  11-34
  第二章 CD11~cintCD45RB~hiDCreg 的体内鉴定  34-46
第二部分一种新型 IL-10 分泌型巨噬细胞的体外鉴定  46-55
  第一章新型巨噬细胞的体外鉴定  47-52
  第二章这种新型巨噬细胞对 T 细胞的影响  52-55
参考文献  55-63
文献综述  63-72
  参考文献  69-72
缩略语表  72-73
攻读学位期间发表文章情况  73-74
个人简历  74-75
致谢  75-76

CD11cintCD45RBhiDCreg及一群新型IL-10分泌型巨噬细胞的体内外鉴定

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