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jumeau基因对果蝇发育及天然免疫的影响

作　者: 郝阳光
导　师: 金丽华
学　校: 东北林业大学
专　业: 遗传学
关键词: 天然免疫发育 jumu基因血细胞脂肪体
分类号: Q75
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 24次
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内容摘要

Jumeau (Jumu)是首个被发现具有双重功能的FKH/WH家族蛋白,该蛋白作为典型的转录因子在果蝇的发育中发挥重要作用,同时作为多蛋白复合体的重要组成部分能够引起异染色质的大规模修饰。自2000年Martin StroEdicke等人发现Jumu蛋白以来,对该蛋白的功能研究主要集中在染色质修饰及发育等方面,而在天然免疫方面的研究却很少。本研究成功制备了抗Jumu的多克隆抗体,并通过Western blot及免疫染色等试验验证了该抗体具有较好的结合天然抗原的能力。利用P因子切除手段获得了两种jumu低表达突变体果蝇及一种jumu回复突变体,同时运用UAS-Gal4系统,我们获得了可以使jumu基因在果蝇不同发育时期及组织中特异性表达的转基因果蝇品系。本研究利用获得的低表达及高表达突变体分析了jumu基因对果蝇发育及血细胞分化的影响,结果表明jumu缺失能够导致血细胞的异常增加,而在脂肪体或血细胞中过表达jumu能够有效缓解血细胞增加的现象。同时RT-PCR检测发现jumu能够影响与血细胞分化相关转录因子的表达。此外该研究还发现jumu能够影响幼虫脂肪体及血细胞中抗菌肽的组成型表达,且对大部分抗菌肽的产生具有正调控作用。以上发现为以后进一步研究人类WHN家族蛋白及jumu蛋白对天然免疫的影响机制提供了理论依据及参考价值。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1 绪论  8-14
  1.1 果蝇的应用及研究进展  8-9
  1.2 果蝇的天然免疫  9-11
    1.2.1 体液免疫  9-10
    1.2.2 细胞免疫  10-11
    1.2.3 黑化反应  11
  1.3 P因子及UAS-Gal4系统的应用  11-12
  1.4 jumu基因的研究进展  12-13
  1.5 本研究的目的与意义  13-14
2 材料与方法  14-23
  2.1 抗Jumu蛋白多克隆抗体的制备  14-16
    2.1.1 实验材料及试剂  14
    2.1.2 原核表达质粒的构建及鉴定  14
    2.1.3 目的蛋白的原核表达及纯化  14-15
    2.1.4 多克隆抗体的制备  15
    2.1.5 Western-blot  15
    2.1.6 免疫荧光染色检测  15-16
  2.2 jumu低表达突变体的获得  16-19
    2.2.1 果蝇品系及试剂  16
    2.2.2 利用P因子切除方法获得突变体  16-17
    2.2.3 果蝇基因组DNA的提取  17
    2.2.4 果蝇RNA提取  17-18
    2.2.5 PCR检测突变体P因子切除情况  18-19
    2.2.6 半定量RT-PCR检测突变体果蝇jumu基因的表达  19
  2.3 过表达jumu突变体的制备  19-20
    2.3.1 果蝇品系  19
    2.3.2 过表达jumu突变体的制备方法  19-20
  2.4 RT-PCR检测jumu在不同发育时期及组织中的表达  20
  2.5 血细胞计数  20-21
  2.6 果蝇羽化率的统计  21
  2.7 抗菌肽基因的RT-PCR检测  21-22
  2.8 血细胞分化相关基因的RT-PCR检测  22-23
3 结果与分析  23-35
  3.1 Jumu蛋白多克隆抗体的制备  23-25
    3.1.1 重组质粒pRSETA-jumu的构建及酶切鉴定  23-24
    3.1.2 Jumu蛋白的原核表达与纯化  24
    3.1.3 Western blot鉴定多克隆抗体的特异性  24-25
    3.1.4 免疫荧光染色验证抗体的特异性  25
  3.2 jumu基因在不同发育时期及组织中的表达分析  25-26
    3.2.1 RT-PCR检测jumu在果蝇不同发育时期的转录水平  25-26
    3.2.2 jumu在幼虫的各组织中的表达分析  26
  3.3 低表达jumu对果蝇发育及血细胞分化的影响  26-29
    3.3.1 利用P因子切除方法成功获得jumu低表达突变体  26-28
    3.3.2 低表达jumu对果蝇发育的影响  28-29
    3.3.3 低表达jumu导致血细胞异常增加  29
  3.4 广泛及组织特异性表达jumu基因对jumu突变体表型的影响分析  29-31
    3.4.1 全身过量表达jumu能够减弱突变体果蝇血细胞的异常增加  29-30
    3.4.2 组织特异性过表达jumu对血细胞分化及果蝇发育的影响  30-31
  3.5 jumu对血细胞分化相关基因的转录调节分析  31-32
  3.6 jumu对抗菌肽基因的转录调节分析  32-35
4 讨论  35-38
  4.1 Jumu蛋白多克隆抗体的制备  35
  4.2 jumu对果蝇发育的影响  35-36
  4.3 jumu对果蝇血细胞分化的影响  36-37
  4.4 jumu对果蝇抗菌肽基因表达的影响  37-38
结论  38-39
参考文献  39-45
攻读学位期间发表的学术论文  45-46
致谢  46-47

jumeau基因对果蝇发育及天然免疫的影响

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