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miRNAs对骨髓间充质干细胞分化的影响

作　者: 于鹏
导　师: 翁习生
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: miRNA 破骨分化骨髓间充质干细胞
分类号: R329.2
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

研究背景miRNA(microRNA)是一类短小的非编码单链小分子RNA,通过转录后调节对基因表达发挥着重要调控作用。多项研究表明,miRNA在细胞增殖、分化、凋亡、分泌、迁移、恶性转化等细胞功能方面存在重要调控功能,在生物体的生长发育、信号转导通路、组织器官分化、疾病的发生发展等复杂的生物学过程中亦扮演着重要角色。骨髓间充质干细胞(BMSC)是一类具有多向分化潜能的干细胞,可以分化为多种中胚层细胞及数种非中胚层细胞。已经有很多研究证明骨髓间充质干细胞分化异常在诸如股骨头坏死、骨质疏松等疾病当中扮演着重要角色。miRNA通过对大量基因进行转录后调控,对骨髓间充质干细胞的分化方向产生重要的调控作用。本研究拟在本课题组前期研究的基础上对此前筛选出的miRNAs进行功能验证,明确其对骨髓间充质干细胞分化方向的影响。研究目的1.复苏、培养、传代BMSC,用生物信息学方法对此前研究所得miRNA进行筛选；2.定(?)(?)agomir及antagomir,通过转染改变骨髓间充质干细胞内相应miRNA的水平,通过染色研究转染后骨髓间充质干细胞分化方向,从而筛选出对骨髓间充质干细胞分化方向存在影响的miRNA;3.采用全基因组芯片检测受至(?)miRNA调控的靶基因及其表达水平。研究方法采用ScienCell公司的骨髓间充质干细胞,经复苏、培养、传代后取得骨髓间充质干细胞第三-第八代,采用agomir和antagomir对骨髓间充质干细胞进行转染,于转染后96小时进行油红0染色、茜素红染色、Ⅱ型胶原染色,观察向成骨、成脂、成软骨方向的分化能力;将转染后的骨髓间充质干细胞提取RNA后送检基因芯片,筛选差异表达的基因。研究结果1.复苏、培养、传代后得到骨髓间充质干细胞P3-P8代;结合生物信息学,根据此前试验的结果进一步筛选出对骨髓间充质干细胞分化可能存在影响的8种miRNA;2.结合agomir、antagomir转染及油红0、茜素红、Ⅱ型胶原染色结果,Hsa-miR-1303具备调控骨髓间充质干细胞分化的能力：3.采用全基因组芯片检钡JmiRNA转染前后的基因表达变化,从而得出hsa-mir-1303调控的靶基因：ANKH;结论1.应用生物信息学方法筛选出的8种miRNA当中,has-mir-1303可以调控骨髓间充质干细胞分化。2.应用全基因组芯片验证出has-mir-1303的靶基因：ANKH;经功能富集分析得出has-mir-1303的功能：调节破骨分化。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-11
实验一人骨髓间充质干细胞的复苏、培养、传代及糖皮质激素调控的MIRNA的筛选  11-21
  第一部分人骨髓间充质干细胞的复苏、培养、传代  11-13
    1.1.1 材料  11-12
    1.1.2 方法  12
    1.1.3 结果  12-13
    1.1.4 讨论  13
  第二部分利用生物信息学方法对BMSC成脂分化相关MIRNAS的筛选  13-21
    1.2.1 生物信息学预测所釆用的软件、数据库  13-14
    1.2.2 基于通路的miRNA预测  14-19
    1.2.3 结果与讨论  19-21
实验二 BMSC的瞬时转染及油红O、茜素红、Ⅱ型胶原染色  21-28
  2.1 BMSC的转染  22-24
  2.2 油红O染色评价MIRNA对BMSC成脂分化的影响  24
  2.3 茜素红染色评价MIRNA对BMSC成骨分化的影响  24-25
  2.4 Ⅱ型胶原染色评价MIRNA对BMSC成脂分化的影响  25-27
  2.5 实验结果  27
  2.6 讨论  27-28
实验三 HAS-MIR-1303的功能研究——全基因组芯片对MIR-1303靶基因及作用通路的识别  28-44
  3.1 材料与方法  29-37
  3.2 结果  37-42
  3.4 讨论  42-44
附图  44-53
参考文献  53-55
文献回顾  55-62
  参考文献  60-62
致谢  62

miRNAs对骨髓间充质干细胞分化的影响

内容摘要

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