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A112对HL-60细胞和NB4细胞的抑制作用

作　者: 袁超
导　师: 曲显俊
学　校: 山东大学
专　业: 药理学
关键词: 他米巴罗汀二甲基氨基乙酯白血病生长抑制凋亡
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究目的：A112是他米巴罗汀的二甲氨基乙酯的酯化物,为治疗急性早幼粒细胞白血病和其他类型白血病的侯选化合物。本研究的目的是通过与他米巴罗汀对比其对HL-60细胞和NB4细胞的抑制作用,评估其抗肿瘤的活性。方法：在体外试验中,用MTT试验用来评估体外试验中A112和他米巴罗汀对HL-60细胞的抑制率,采用Annexin-Ⅴ/PI染色法分析细胞分别在A112和他米巴罗汀作用下的凋亡情况,用western印记分析法分析测定HL-60细胞中凋亡蛋白(包括胱天蛋白酶3,9和PARP等)的水平变化。在体内试验中,对HL-60荷瘤小鼠,通过尾静脉注射A112三周,然后计算肿瘤重量减少的百分率,计算肿瘤生长抑制率,从而评判抑瘤效果。另外将HL-60异体移植瘤取出,进行TUNEL染色和western印记分析法来分析胱天蛋白酶3,9和PARP等凋亡蛋白的表达水平。主要结果：通过MTT分析,A112能有效地抑制HL-60细胞的生长,并且发现A112的抑制作用在同等条件下比他米巴罗汀的作用要明显。通过流式细胞仪来分析Annexin-Ⅴ阳性细胞和TUNEL染色的小鼠荷瘤HL-60细胞,发现A112可显著地诱发HL-60细胞凋亡。经尾静脉注射给药A112三周后的荷瘤小鼠,肿瘤的生长受到抑制,这更证明了A112的抑瘤作用。而且在与他米巴罗汀对照后发现,A112对移植瘤的抑制作用强于他米巴罗汀。进一步用western印记分析法研究凋亡蛋白,在体内试验和体外试验中发现,A112都可提高细胞中凋亡蛋白(包括胱天蛋白酶3,9和PARP等)的表达。在裸鼠血浆中检测两药的浓度时发现,A112持续释放其水解产物他米巴罗汀,比注射他米巴罗汀能维持更长时间的有效高浓度。我们还研究了在两药作用下细胞的形态学变化,发现完成分化的NB4细胞数量增加,这提示A112抑制白血病细胞生长与其诱导分化作用有关。进一步研究发现,通过免疫荧光测试,看到一种白细胞完全分化标记物CD11水平增高。另外A112还可以诱导C/EBPβ和CDK抑制剂p21 Wafl/cipl和p27Kipl的活性。主要结论：这些结果证实A112对白血病细胞增长具有较强的抑制作用,机制与诱导凋亡有关。

全文目录

中文摘要  6-8
Abstract  8-12
前言  12-20
  1. APL的发病机制  12-14
  2. 常用的诱导分化药物  14-17
  3. 分化诱导中肿瘤细胞表型的测定  17-20
简介  20-21
材料和方法  21-28
  1. 材料  21-24
  2. 实验方法  24-28
实验结果  28-39
  1. A112抑制白血病细胞HL-60生长的作用  28-29
  2. 裸鼠体内的移植瘤的抑制作用  29-31
  3. 血浆内A112和他米巴罗汀的浓度变化  31-32
  4. Western blot分析  32-35
  5. NB4细胞形态学变化  35
  6. CD11水平变化  35-38
  7. Annexin V染色  38
  8. TUNEL染色  38-39
讨论  39-42
结论  42-43
致谢  43-44
攻读硕士学位期间发表论文  44-45
参考文献  45-50
学位论文评阅及答辩情况表  50

A112对HL-60细胞和NB4细胞的抑制作用

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