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目的视神经损伤是眼科常见疾病,多并发于颅脑外伤,预后不良,常致患者失明。由于视神经损伤的发病机制尚未完全明了,所以迄今为止其治疗仍是国内外眼科界的一大难题。本试验通过建立兔眼视神经夹伤的动物模型,及伤后早期应用氨基胍(Aminogunidine,AG)治疗,动态观察视神经损伤后视网膜病理形态学改变,研究一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量变化及耳缘静脉注射AG对其影响,力求探索一条治疗视神经损伤的新思路,为临床治疗提供实验依据,尽最大可能挽救患者视功能。材料与方法健康成年大耳白兔66只,3-4月龄,雌雄不限,体重2.5±0.2kg,检查双眼屈光间质清,瞳孔等大等圆,对光反射正常,眼底无异常。将实验兔随机分为正常对照组、损伤治疗组、损伤对照组共3组。正常对照组(6只,12只眼):从66只兔中随机抽取6只。损伤治疗组:余60只兔用同一反向动脉夹于球后3mm处夹闭视神经20s制成视神经损伤的动物模型,然后随机抽取30只给予2﹪AG80mg/kg耳缘静脉注射,每日1次;损伤对照组:另外30只耳缘静脉注射等量生理盐水。按照视神经损伤后1d、3d、7d、14d、21d又随机分为5组,每组兔(6只,12只眼)。造模成功后分别于伤后1d、3d、7d、14d、21d处死动物,取出眼球,其中一部分眼球固定、石蜡包埋常规做视网膜切片,进行HE染色及视网膜凋亡细胞(TUNEL)检测,光镜观察视网膜形态改变。另一部分眼球于冰盐水上小心剥下视网膜组织,匀浆,分光光度计检测NO、iNOS、MDA、SOD的含量变化,结果进行图像分析,所得数据资料均用spss13.0软件包进行统计分析。结果1.视网膜HE染色:正常对照组视网膜内界膜平滑完整,三层细胞分界清楚,节细胞呈单层排列,按胞核大小分为两类:一类大核浅染;另一类小核深染,核内染色质分布均匀。内、外核层细胞均呈多层排列,其厚度、染色均匀,细胞排列整齐紧密。损伤对照组:伤后1d,可见视网膜组织轻度水肿,视网膜各层结构完整;伤后3d,视网膜水肿加重,偶见空泡变性;伤后7d、14d视网膜全层高度水肿,以神经纤维层、神经节细胞层与内丛状层水肿最为明显,各层细胞排列疏松,细胞间隙增大;伤后21d主要表现视网膜水肿减轻,RGCs数量减少,部分细胞空泡样变,内、外核层细胞排列紊乱,细胞数量减少,视网膜内层明显变薄。损伤治疗组:同一时间点损伤治疗组视网膜的病理改变(细胞间隙,组织水肿,细胞减少),均较损伤对照组明显减轻。2.TUNEL染色凋亡细胞计数和定位:视网膜切片中显示TUNEL阳性细胞(凋亡细胞)不仅见于视网膜神经节细胞层,还见于内外核层。凋亡细胞胞核染色,呈棕黄色,部分可由于核固缩扭曲破裂而失去正常形态,并可见凋亡小体。正常对照组视网膜切片极少见到凋亡细胞。本实验仅计数节细胞层的凋亡情况进行比较研究。同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.NO含量,iNOS活力测定:正常视网膜组织中很少表达iNOS,但含有少量NO,在损伤后二者含量逐渐增高,同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较,NO含量和iNOS活性差异有统计学意义(P <0.05)。4. MDA含量, SOD活力检测:正常视网膜组织匀浆中含一定量的MDA和SOD。同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较,MDA含量差异有统计学意义(P <0.05)。同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较,SOD活性差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.视神经夹伤后,损伤治疗组各时间点视网膜的病理改变,均较损伤对照组明显减轻。提示伤后早期耳缘静脉注射AG进行干预治疗能够及时挽救未受损的视网膜细胞,对维持视网膜的形态和功能起到了重要作用。2.正常视网膜组织中很少表达iNOS,但含有少量NO,在损伤后二者含量逐渐增高,其结果与视神经损伤后RGCs的凋亡趋势相吻合,说明视神经损伤后NO、iNOS的大量生成是引起RGCs凋亡的一个因素。3.视神经夹伤后视网膜组织中的MDA含量逐渐升高,随着组织损伤的进一步加重,SOD逐渐减少,削弱了其对视神经视网膜的保护作用。结果说明在视神经损伤后视网膜组织内MDA不断产生,SOD不断被消耗,致使自由基不断堆积,导致细胞出现不可逆损伤。4.视神经夹伤后早期耳缘静脉注射AG进行干预治疗能够一定程度减少损伤后RGCs的凋亡。提示AG通过抑制iNOS合成减少NO的产生,同时也抑制自由基的生成,对视神经损伤后的RGCs起到保护作用。
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