学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

薯蓣皂苷对扑热息痛诱导肝损伤的保护作用研究

作　者: 肇小茗
导　师: 彭金咏
学　校: 大连医科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 扑热息痛薯蓣皂苷肝损伤线粒体
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 7次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：研究薯蓣皂苷对扑热息痛诱导肝损伤的保护作用，并探讨其可能的分子作用机制。方法：在体外实验中，薯蓣皂苷预处理HepG2细胞6小时后再用10mM APAP处理24小时，MTT法检测细胞活力，测定GSH和AST含量；JC-1和透射电镜检测线粒体膜电位和观察线粒体形态；TUNEL、AO/EB、DAPI荧光染色和单细胞凝胶电泳检测细胞凋亡和坏死情况。在体内实验中，小鼠口服薯蓣皂苷（25、50和100mg/kg）5天后给予APAP来考察薯蓣皂苷对急性肝损伤的保护作用，以水飞蓟素（200mg/kg）为阳性对照。测定了ALT、AST、MDA、GSH、GSSG和肝脏指数；组织病理学结合TUNEL、AO/EB和DAPI荧光分析考察肝细胞的坏死和凋亡；JC-1检测线粒体膜电位，透射电镜观察线粒体形态，并检测了线粒体内心磷脂、Ca²⁺含量以及Ca²⁺-ATP酶（ATP2A2）的表达。在分子机制研究方面，用二维凝胶电泳结合MALDI-TOF/TOF-MS/MS技术探讨不同组别小鼠肝脏差异蛋白表达，并采用western blot、酶联免疫法（ELISA）和免疫组织化学法（IHC）等方法验证了相关差异蛋白。最后考察薯蓣皂苷对线粒体相关蛋白（CYP2E1、Bax、p53、Bak、Bcl-2和Bid）表达的影响。结果：实验结果显示，薯蓣皂苷在体外可以抑制APAP诱导的HepG2细胞活力下降、AST释放、线粒体膜电位下降以及细胞凋亡和坏死。薯蓣皂苷可以显著抑制APAP引起小鼠肝脏ALT （2507±484vs.233±86U/L）和AST（702±184vs.106±57U/L）活性的升高，逆转APAP诱导的肝脏MDA含量升高，GSSG升高和GSH降低，并降低小鼠的肝脏指数，减轻APAP造成的肝细胞坏死和凋亡。薯蓣皂苷还可保护线粒体形态完整、稳定线粒体膜电位（76±11vs.102±6RFU）、升高线粒体内心磷脂、降低Ca²⁺含量（22.2±0.7vs.14.5±0.9RFU）以及上调Ca²⁺-ATP酶（ATP2A2）表达（4.93倍），在100mg/kg给药剂量时的药效强于给药剂量为200mg/kg水飞蓟素产生的药效。经蛋白组学技术从小鼠肝脏中鉴定出15个表达差异蛋白，并验证了其中的亚硫酸盐氧化酶（sulfite oxidase, Suox）、过氧化物还原酶-1（peroxiredoxin-1, Prdx1）、衰老标记蛋白（regucalcin, Rgn）、角蛋白18（cytoskeletal18, Krt18）、苹果酸脱氢酶（malatedehydrogenase, Mdh1）和嘌呤核苷酸磷酸化酶（purine nucleoside phosphorylase,Pnp）六个差异蛋白的表达。与模型组相比，薯蓣皂苷可以显著上调Suox、Prdx1和Rgn蛋白表达（1.65、20.2和1.46倍），升高肝脏中Mdh1和Pnp的含量（p <0.01），下调Krt18蛋白表达（1.53倍）。进一步的研究表明薯蓣皂苷可以下调CYP2E1、p53、BAK和Bax蛋白表达，上调Bcl-2和Bid蛋白表达。结论：本实验首次发现薯蓣皂苷对APAP诱导急性肝损伤具有显著的保护作用，这种保护作用可能与调节线粒体功能有关。这为薯蓣皂苷的深入研究和开发奠定了基础，又为肝脏疾病的预防和治疗提供了实验资料。

薯蓣皂苷对扑热息痛诱导肝损伤的保护作用研究

内容摘要

全文目录

相似论文