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磁性高分子微球技术及其去除内毒素的效果评价

作　者: 来灿林
导　师: 应国清; 易喻
学　校: 浙江工业大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 磁性微球内毒素反相悬浮壳聚糖
分类号: R943
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

磁性高分子微球具有简便快捷，处理量大，易于操作等特点，目前在很多领域已得到广泛应用。本论文制备了几种磁性高分子微球，并开展了将其应用于内毒素吸附的研究。主要结论如下：通过反相悬浮法制备了磁性壳聚糖微球(MCM)并对制备条件进行了优化，之后偶联了组氨酸(His)及四乙烯五胺(TEPA)配基并用于内毒素的吸附；MCM-His对内毒素的吸附行为较符合Langmuir模型，理论最大吸附容量为2210.2EU/g；在牛血清白蛋白(BSA)溶液中两种吸附剂对内毒素的吸附率分别为74.0%和58.2%，对BSA的吸附率分别为1.2%和3.7%。以甲醛、戊二醛为交联剂制备了磁性壳聚糖阴离子交换剂(ARMCM)，并对制备方法进行了改进。利用ARMCM中壳聚糖本身的氨基对内毒素进行吸附，结果表明，其吸附行为符合Langmuir模型，R2=0.9996，最大吸附容量为1792.1EU/g。在蛋白溶液中的吸附结果表明其对酸性蛋白和碱性蛋白的吸附率均较低，分别为23.2%和2.0%，而对内毒素的吸附率分别为77.5%和79.5%。最后制备了以磁性琼脂糖、葡聚糖微球为母体的四种内毒素吸附剂，其中吸附容量最大的为偶联有TEPA的磁性琼脂糖微球(MAM-TEPA)，达到1467.2EU/g。几种吸附剂在蛋白溶液中的吸附效果也具有一定选择性，其中MAM-TEPA内毒素吸附率达到77.5%，蛋白吸附率为17.3%。预期本课题开发的几种磁性高分子微球，经过进一步的优化与改进后，未来将在生物制品中内毒素的去除过程中得到广泛的应用。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-10
第一章绪论  10-21
  1.1 磁性高分子微球  10-13
    1.1.1 磁性高分子微球的结构  10-11
    1.1.2 磁性高分子微球的组成  11-13
  1.2 磁性高分子微球的制备方法  13-15
    1.2.1 包埋法  13
    1.2.2 聚合法  13-15
    1.2.3 原位法  15
  1.3 磁性高分子微球的应用  15-18
    1.3.1 细胞分离  16
    1.3.2 酶的固定化  16
    1.3.3 免疫检测分析  16-17
    1.3.4 生物物质分离  17
    1.3.5 有害物质的吸附  17-18
  1.4 内毒素的结构与组成  18
  1.5 内毒素的去除方法  18-20
    1.5.1 活性炭吸附  19
    1.5.2 膜分离  19
    1.5.3 层析  19-20
    1.5.4 其他  20
  1.6 本课题的研究目的与内容  20-21
第二章磁性壳聚糖微球亲和吸附剂的制备及应用  21-40
  2.1 引言  21
  2.2 材料与方法  21-24
    2.2.1 原料与试剂  21-22
    2.2.2 仪器  22-23
    2.2.3 实验方法  23-24
  2.3 吸附剂的表征  24-26
    2.3.1 质量平均粒径的测定  25
    2.3.2 环氧基密度测定  25
    2.3.3 配基密度测定  25-26
  2.4 内毒素的吸附与检测  26-29
    2.4.1 内毒素的检测  26-28
    2.4.2 吸附实验  28-29
  2.5 结果与讨论  29-39
    2.5.1 磁性壳聚糖微球的制备  29-31
    2.5.2 环氧氯丙烷活化条件的影响  31-33
    2.5.3 磁性壳聚糖微球亲和吸附剂的表征  33-36
    2.5.4 内毒素标准曲线  36
    2.5.5 吸附效果评价  36-39
  2.6 小结  39-40
第三章磁性壳聚糖阴离子交换剂的制备及应用  40-53
  3.1 引言  40-41
  3.2 材料与方法  41-43
    3.2.1 原料与试剂  41
    3.2.2 仪器  41
    3.2.3 实验方法  41-43
  3.3 吸附剂的表征  43-44
    3.3.1 形态、粒径与磁性能  43
    3.3.2 湿真密度  43
    3.3.3 氨基含量  43
    3.3.4 四氧化三铁含量  43-44
    3.3.5 溶胀比  44
  3.4 内毒素的吸附与检测  44-45
    3.4.1 内毒素的检测  44
    3.4.2 吸附实验  44-45
  3.5 结果与讨论  45-52
    3.5.1 磁性壳聚糖微球的制备  45-46
    3.5.2 磁性壳聚糖微球亲和吸附剂的表征  46-48
    3.5.3 吸附效果评价  48-52
  3.6 小结  52-53
第四章磁性琼脂糖、葡聚糖亲和吸附剂的制备及应用  53-64
  4.1 引言  53
  4.2 材料与方法  53-55
    4.2.1 原料与试剂  53-54
    4.2.2 仪器  54
    4.2.3 实验方法  54-55
  4.3 吸附剂的表征  55
  4.4 内毒素的吸附与检测  55
    4.4.1 内毒素的检测  55
    4.4.2 吸附实验  55
  4.5 结果与讨论  55-63
    4.5.1 磁性葡聚糖、琼脂糖微球的保存  55-56
    4.5.2 环氧氯丙烷活化条件的优化  56-60
    4.5.3 磁性葡聚糖、琼脂糖微球亲和吸附剂的表征  60-61
    4.5.4 吸附效果评价  61-63
  4.6 小结  63-64
第五章结论与展望  64-66
  5.1 结论  64-65
  5.2 展望  65-66
参考文献  66-71
致谢  71-72
攻读硕士学位期间发表论文、专利情况  72

磁性高分子微球技术及其去除内毒素的效果评价

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