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Caspase-3、Bax、Bcl-2和Beclin-1在慢性紫外线损伤小鼠模型表皮角质形成细胞中的表达及意义

作　者: 王莹
导　师: 周之海
学　校: 天津医科大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 紫外线 角质形成细胞 慢性UV损伤 Bax Bcl-2 Beclin-1
分类号: R751
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


随着全球环境的剧烈变化,人类生存活动受到紫外线辐射(Ultraviolet, UV)的威胁日益加剧,皮肤在接受慢性紫外线照射过程中可能出现皮肤粗糙、皱纹形成、弹性下降、色素沉着增多等,甚至可能引起各种良性或恶性肿瘤等。近年来越来越多的学者致力于慢性UV损伤的研究,但其与凋亡和自噬的关系仍未明确。目的完善建立慢性UV损伤小鼠模型。观察慢性紫外线损伤对实验小鼠背部皮肤角质形成细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Bax、Bcl-2、Beclin-1等凋亡与自噬相关蛋白表达强度的变化,分析其生物学意义。方法采用UV治疗仪(UVA+UVB)光源对实验小鼠进行照射,完善建立慢性UV损伤小鼠模型。UV照射剂量从最小红斑量(UVB0.07J/cm2,UVA0.7J/cm2)开始,每周增加0.5个红斑量,1次/d；每周照射5天,共9周。UVB总剂量达9.45J/cm2,UVA总剂量达94.5J/cm2。通过肉眼观察、组织学观察、显微镜下小鼠表皮厚度的测量及胶原纤维、弹力纤维特殊染色等方法发现实验组小鼠背部UV照光部位皮肤的临床表现和组织学改变与慢性UV损伤的人类皮肤较为吻合,确定慢性UV损伤小鼠模型成功建立。应用免疫组织化学法分别对实验小鼠UV照射前WO(Week O,实验前取皮时间点)和照射后W9(Week9,实验9周末取皮时间点)两个时间点表皮角质形成内Caspase-3、Bax、Bcl-2和Beclin-1等凋亡与自噬相关蛋白的表达强度进行检测,表达强度以免疫反应强度分布指数(IRIDI)表示,并与对照组进行比对分析。实验中应用配对t检验、Wilcoxon符号秩和检验和Spearman等级相关分析分别进行统计分析。结果在实验组小鼠W0时Caspase-3、Beclin-1、Bax、Bcl-2的表达计分均值(范围)分别为0.25(0～2)、0.30(0～2)、0.35(0～2)、0.25(0～1),照光后四个指标分别为3.30(2～9)、2.70(2～6)、3.35(2～6)、0.25(0～1)。实验组小鼠表皮角质形成细胞中Caspase-3、Beclin-1、Bax蛋白表达显著升高,且差异有统计学意义(P均<0.05)；Bcl-2蛋白表达变化不明显,且无统计学意义(P>0.05)。实验组小鼠W9时Bax和Csapase-3的表达均明显增加,且二者的增加有相关性(r=0.713,P<0.05)。实验组小鼠W9时Beclin-1和Bax的表达明显高于Bc1-2(P均<0.05)。在对照组小鼠W0时Caspase-3、Beclin-1、Bax、 Bcl-2的均值(范围)为0.20(0～1)、0.20(0～1)、0.30(0～1)、0.20(0～1),W9时为0.20(0-1)、0.30(0-1)、0.30(0-1)、0.10(0-1),经Wilcoxon符号秩和检验分析对照组小鼠Caspase-3、Beclin-1、Bax、Bcl-2表达变化均无统计学意义(P>0.05)。结论重复UV照射可以诱导实验小鼠表皮角质形成细胞中Caspase-3表达上调,凋亡活性上升,且这种凋亡活性的上升与Bax的表达上调存在密切关系。慢性UV损伤对小鼠皮肤角质形成细胞中凋亡和自噬的交互调控元件Beclin-1和Bax具有上调表达的作用,而对另一元件Bcl-2表达调控效应不显著。这一系列的调控效应可能参与了凋亡和自噬在慢性UV皮肤损伤中的交互调控。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语/符号说明  10-11
前言  11-14
  研究现状、成果  11-13
  研究目的、方法  13-14
实验一 慢性UV损伤小鼠模型的建立  14-26
  1.对象和方法  14-20
    1.1 实验主要试剂配置和溶液  14
    1.2 实验主要仪器  14
    1.3 实验对象  14-15
    1.4 制作慢性UV损伤动物模型的方法  15-17
    1.5 实验方法  17-20
  2.结果  20-23
    2.1 肉眼观察  20
    2.2 组织学观察和胶原纤维、弹力纤维特殊染色  20-22
    2.3 实验小鼠表皮厚度的改变  22-23
  3.讨论  23-25
    3.1 慢性UV损伤小鼠模型的选择  23
    3.2 照光波长的选择  23-24
    3.3 确定慢性UV损伤模型的建立  24-25
  4.小结  25-26
实验二 Caspase-3、Bax、Bcl-2、Beclin-1在慢性UV损伤小鼠模型角质形成细胞中的表达研究  26-41
  1.对象和方法  26-31
    1.1 实验仪器和试剂  26-27
    1.2 实验对象  27
    1.3 实验方法  27-29
    1.4 结果判定  29
    1.5 统计学分析  29-31
  2.结果  31-38
    2.1 Caspase-3在对照组小鼠和实验组小鼠表皮角质形成细胞中的表达  31-32
    2.2 Beclin-1在对照组小鼠和实验组小鼠表皮角质形成细胞中的表达  32-33
    2.3 Bax在对照组小鼠和实验组小鼠表皮角质形成细胞中的表达  33-34
    2.4 Bcl-2在对照组小鼠和实验组小鼠表皮角质形成细胞中的表达  34-35
    2.5 W9时实验组小鼠表皮角质形成细胞中Bax和Csapase-3表达的相关性分析  35-36
    2.6 W9时实验组小鼠表皮角质形成细胞中Bax和Bcl-2表达的统计学分析  36
    2.7 W9时实验组小鼠表皮角质形成细胞中Beclin-1和Bcl-2之间的统计学分  36-38
  3.讨论  38-41
结论  41-42
参考文献  42-46
发表论文和参加科研情况说明  46-47
综述  47-58
  综述参考文献  54-58
致谢  58-59
论文资助及参加单位说明  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 皮肤病学与性病学 > 皮肤病学
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