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人羊膜上皮细胞修复放射性损伤小鼠唾液腺的实验研究

作　者: 韩庆宾
导　师: 黄桂林
学　校: 遵义医学院
专　业: 口腔颌面外科学
关键词: 人羊膜上皮细胞分化C57BL/6小鼠下颌下腺放射损伤
分类号: R782
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：基于人羊膜上皮细胞在体外诱导下具有向唾液腺腺泡细胞分化的能力,进一步研究人羊膜上皮细胞在小鼠放射损伤唾液腺中分化的能力,为唾液腺疾病的干细胞治疗提供新的种子细胞来源。方法：(1)本实验采用机械法和胰酶消化法从人羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),在体外进行细胞培养,通过流式细胞(FCM)技术和免疫组化鉴定人羊膜上皮细胞表型。(2)雄性C57BL/6小鼠40只,在唾液腺局部给予15Gy剂量的x线放射损伤。(3)经原位移植途径将分离纯化的第二代人羊膜上皮细胞注入到放射损伤小鼠下颔下腺内,非移植组注入等量无血清L-DMEM培养基。于移植后1w、2w、4w、6w分别进行组织病理学、双重免疫荧光染色检测。结果：(1)分离的人羊膜上皮细胞具有干细胞表型特征,CD29、CD73和CK19表达阳性,不表达CD44、CD34、CD45和CD71。(2)放射损伤后小鼠体重明显下降,放射后小鼠唾液流量明显小于正常小鼠。组织病理学检查见放射损伤小鼠下颌下腺放射后第6天可见腺体内血管充血,10天腺小叶内见少量空隙。放射后30天见大量浆液性腺泡消失。(3)人羊膜上皮细胞移植后1w、2w、4w、6w均可检测到hAECs的存活,人羊膜上皮细胞移植后4周冰冻切片双重免疫荧光染色见颌下腺中hAECs表达淀粉酶、CK7、CK14。人羊膜上皮细胞原位移植后,组织病理切片1周后可以观察到浆液性腺泡的数量增加,通过HE切片观察,1个月后,放射损伤的颌下腺中浆液性腺泡的数量约恢复至正常水平。(4) hAECs移植后1个月小鼠唾液流量平均约为(125.68±18.64)μL/15min,为正常小鼠唾液流量约(259.36±9.74)μL的48.5%。明显高于未移植小鼠。结论：人羊膜上皮细胞可在放射损伤小鼠颌下腺原位分化成腺泡细胞和导管上皮细胞,改善唾液腺功能,提示人羊膜上皮细胞可能成为唾液腺损伤修复重建新的细胞来源。

全文目录

英文缩略词表  4-6
中文摘要  6-7
Abstract  7-9
前言  9-11
材料与方法  11-21
结果  21-34
讨论  34-37
结论  37-38
参考文献  38-43
综述  43-61
  参考文献  52-61
致谢  61-62
作者简介  62

人羊膜上皮细胞修复放射性损伤小鼠唾液腺的实验研究

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