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胃泌素/CCK2R诱导胃癌细胞环氧化酶-2表达及其分子机制研究

作　者: 徐伟
导　师: 孙为豪
学　校: 南京医科大学
专　业: 老年医学
关键词: 胃泌素 胃泌素受体 蛋白酪氨酸激酶2/信号传导蛋白和转录激活物-3 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B 环氧化酶2
分类号: R735.2
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


背景：胃癌是全球癌症死亡的主要原因之一，其中有70%以上的新发和死亡病例发生在发展中国家，尤其是我国在内的东南亚地区。流行病学资料显示，幽门螺杆菌感染是胃癌发病的一个重要因素。幽门螺杆菌感染引起的高胃泌素血症伴环氧化酶2（cyclooxygenase-2, COX-2）的持续高表达在胃癌的发生发展中起了重要作用。胃泌素是一种主要由胃窦G细胞分泌的重要的胃肠激素，其主要的生理学作用是促进胃酸分泌以及对胃黏膜细胞的营养作用。近年来发现，胃泌素在促进胃肠道恶性肿瘤的发生发展中也起了重要的作用。我们前期的研究发现：COX-2可能是胃泌素的下游靶标之一，但胃泌素调控COX-2表达的机制目前尚未完全明确，探索胃泌素调控胃癌细胞COX-2表达的具体分子机制，能为建立有效阻断策略与多靶点防治胃癌提供理论依据与实验基础。目的：研究胃泌素对胃癌细胞COX-2基因的调节以及对胃癌细胞增殖的影响，探讨相关信号转导通路与关键信号分子，进一步明确胃泌素调控COX-2表达的具体分子机制。方法：1.研究对象：选取两株不同分化程度且CCK2R阳性的胃癌细胞SGC-7901与MKN-45作为研究对象。2. RNA干涉：设计并合成针对目的基因的特异性小干涉RNA，瞬时转染胃癌细胞，下调目的基因的表达。3.过表达质粒的构建与转染：设计并合成包含目的基因全长cDNA片段的过表达质粒，瞬时转染胃癌细胞，进一步上调目的基因的表达。4.实时荧光定量多聚酶链反应：收集转染siRNA或过表达质粒的胃癌细胞，抽提总RNA并逆转录，实时荧光定量多聚酶链反应检测转染后胃癌细胞目的基因mRNA的表达水平，以GAPDH的表达作为内参照，评价干涉及过表达效率。5.免疫印迹法：鉴定转染后胃癌细胞目的基因蛋白的表达水平，检测胃泌素对胃癌细胞COX-2表达的调控作用以及相关信号通路与关键信号分子的活化水平。6.细胞增殖抑制实验：MTT法检测不同处理因素下，胃癌细胞的增殖水平。结果：1.胃泌素呈浓度与时间依赖性诱导胃癌细胞COX-2的表达。2.胃泌素诱导胃癌细胞COX-2表达是CCK2R介导的。阻断胃泌素/CCK2R的结合或下调CCK2R的表达能抑制胃泌素诱导的COX-2表达水平，而过表达CCK2R后，胃泌素诱导的COX-2表达进一步升高。3.胃泌素通过CCK2R介导的方式激活JAK2/STAT3与PI3K/AKT信号转导通路。4. JAK2/STAT3与PI3K/AKT信号转导通路参与胃泌素/CCK2R对胃癌细胞COX-2表达的调控，抑制JAK2/STAT3与PI3K/AKT信号转导通路的磷酸化水平对胃泌素诱导的COX-2表达起到抑制作用。5.胃泌素/CCK2R呈浓度与时间依赖性促进胃癌细胞的增殖。CCK2R特异性拮抗剂能抑制胃泌素诱导的胃癌细胞增殖；同时，特异性JAK2抑制剂AG490、PI3K抑制剂LY294002以及选择性COX-2抑制剂NS-398均能抑制胃泌素诱导的胃癌细胞增殖作用。另外，干涉CCK2R或STAT3能阻断胃泌素诱导细胞的增殖，而过表达CCK2R后，胃癌细胞的增殖水平进一步增高。结论：胃泌素通过CCK2R介导激活JAK2/STAT3、PI3K/AKT信号转导通路上调COX-2的表达调控了胃癌细胞的增殖。

全文目录


中文摘要  5-7
Abstract  7-10
第一部分 胃泌素通过 CCK2R 诱导胃癌细胞环氧化酶 2 的表达  10-43
  摘要  10-11
  1 引言  11-13
  2 材料与方法  13-31
  3 结果  31-36
  4 讨论  36-39
  参考文献  39-43
第二部分 胃泌素/CCK2R 诱导胃癌细胞 COX-2 表达的分子机制  43-68
  摘要  43-44
  1 引言  44-47
  2 材料与方法  47-49
  3 结果  49-58
  4 讨论  58-62
  参考文献  62-68
第三部分 胃泌素/CCK2R 诱导 COX-2 表达调控胃癌细胞增殖  68-87
  摘要  68-69
  1 引言  69-71
  2 材料与方法  71-73
  3 结果  73-78
  4 讨论  78-81
  参考文献  81-87
全文总结  87-88
综述  88-106
  参考文献  97-106
附录一： 英文缩略词  106-107
攻读学位期间发表文章情况  107-108
致谢  108

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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