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RNA干扰抑制人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的ERCC2基因表达的研究

作　者: 张琼
导　师: 周航
学　校: 遵义医学院
专　业: 肿瘤学
关键词: RNA干扰 人肺腺癌耐药细胞 ERCC2基因 A549/DDP
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：探讨RNA干扰技术沉默切除修复交叉互补基因组2(Excision repair crosscom-plimentary group2, ERCC2)在人肺腺癌耐药细胞A549/DDP中的表达,为非小细胞肺癌的基因治疗提供实验依据。方法：体外设计及合成靶向人的ERCC2基因的小干扰RNA(siRNA),包括：ERCC2-siRNA1、ERCC2-siRNA2、ERCC2-siRNA3、ERCC2-siRNA4和阴性对照组(NCERCC2-siRNA),构建携带ERCC2-shRNA的质粒表达载体,通过阳离子聚合物EndoFectinTM Lenti转染人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中,用荧光显微镜观察并测定转染效率；real-time PCR检测转染后ERCC2mRNA的表达情况。结果：1、A549/DDP细胞转染后48h,在荧光显微镜下观察到各转染组均有不同比例的eGFP表达,空白对照组无eGFP表达,转染效率最佳的是ERCC2-siRNA2(83.45±3.27%)。2、分别于转染24h、36h、48h后收获细胞,用real-time PCR检测不同ERCC2-siRNA片段转染A549/DDP细胞后ERCC2mRNA的表达情况。转染24h后,ERCC2mRNA相对表达量在ERCC2-siRNAl组为(0.821±0.112)、ERCC2-siRNA2组为(0.452±0.087)、ERCC2-siRNA3组为(0.591±0.127)、ERCC2-siRNA4组为(0.785±0.135),其与空白对照组、NC ERCC2-siRNA组比较,ERCC2mRNA表达均下调,有统计学意义(P<0.05),而ERCC2-siRNA2组有显著差异(P<0.01)；转染36h后,ERCC2mRNA相对表达量在ERCC2-siRNAl组为(0.818±0.101)、ERCC2-siRNA2组为(0.358±0.097)、ERCC2-siRNA3组为(0.576±0.081)、ERCC2-siRNA4组为(0.772±0.174),其与空白对照组、NC ERCC2-siRNA组比较,ERCC2mRNA表达均下调,有统计学意义(P<0.05),而ERCC2-siRNA2组有显著差异(P<0.01)；转染48h后,ERCC2mRNA相对表达量在ERCC2-siRNA1组为(0.813±0.183)、ERCC2-siRNA2组为(0.293±0.118)、ERCC2-siRNA3组为(0.564±0.0861、ERCC2-siRNA4组为(0.763±0.078),其与空白对照组、NC ERCC2-siRNA组比较,ERCC2mRNA表达均下调,有统计学意义(P<0.05),而ERCC2-siRNA2组有显著差异(P<0.01)。结论：1本实验设计及合成的质粒表达载体可被阳离子聚合EndoFectinTM Lenti成功转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP中。2RNA干扰技术可部分下调入肺腺癌耐药细胞A549/DDP中ERCC2mRNA基因表达水平。3构建的靶序列中ERCC2-siRNA2的干扰沉默效果最佳。

全文目录


英文缩略词表  4-5
摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
前言  9-11
材料与方法  11-22
结果  22-28
讨论  28-31
结论  31-32
参考文献  32-34
综述  34-42
  参考文献  39-42
致谢  42-43
作者简介  43

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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