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Neuromedin U对小鼠DRG神经元T型钙离子通道的作用及机制的研究

作　者: 王芬
导　师: 蒋星红；陶金
学　校: 苏州大学
专　业: 神经生物学
关键词: Neuromedin U T型钙通道背根神经节细胞膜兴奋性
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究神经介素U(neuromedin U,NMU)对小鼠背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)神经元T型钙离子通道的作用及机制。方法:培养小鼠背根神经节(DRG)神经元细胞,采用分子生物学的方法鉴定DRG神经元上NMU受体类型的表达。利用全细胞膜片钳技术研究神经介素U(NMU)对小直径的DRG神经元T型钙电流的作用,并用药理学方法研究其信号通路作用机制。结果:本实验研究发现:(1)不论在mRNA水平,还是蛋白水平,小鼠背根神经节上只能见到NMUⅠ型受体表达而未见NMUⅡ型受体表达;(2)电生理研究表明,NMU对背根神经节细胞上的T型钙通道的抑制作用具有剂量依赖关系。1μM NMU对T型钙通道的抑制率约为27.4%;(3)药理学研究发现,NMU对T型钙通道的抑制作用能够被GDP-β-S(特异性G蛋白活性抑制剂)或PTX(百日咳毒素)所阻断,表明NMU是通过Gi/oα亚基发挥作用。运用设置去极化前置脉冲以及电极内液添加G蛋白βγ亚基阻断剂QEHA的方法发现,Gβγ亚基并不参与NMU对T型钙通道的调控。另外,用蛋白激酶A(PKA)的选择性阻断剂H89和PKI5-24预先孵育背根神经节细胞后,NMU对T型钙通道的抑制作用被翻转,而孵育磷脂酶C选择性阻断剂U73122和蛋白激酶C(PKC)的选择性阻断剂GF109203X和Chelerythrine chloride则无此效果。(4)细胞兴奋性研究发现,NMU能够明显降低小直径背根神经节细胞的放电频率,抑制率为51.56±6.53%,而这一作用也能够被100μM的T型钙通道的特异性阻断剂NiCl2翻转。结论:NMU抑制T型钙通道而降低小鼠的小直径背根神经节神经元的兴奋性是通过NMUR1实现的而非NMUR2;NMU对T型钙通道电流的抑制作用是通过PTX敏感的蛋白激酶A(PKA)激活的信号通路。

Neuromedin U对小鼠DRG神经元T型钙离子通道的作用及机制的研究

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