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人乳头瘤病毒16型E7蛋白单克隆抗体的研制

作　者: 阴秀丽
导　师: 陈自平
学　校: 山东大学
专　业: 内科学
关键词: 消化道肿瘤人乳头瘤病毒16(HPV16) E7 单克隆抗体
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

[目的]人乳头瘤病毒(HPV)是自然界中广泛存在的一类DNA病毒,在人群中具有很高的感染率。HPV感染参与多种肿瘤的形成,其中包括各种消化道肿瘤。在HPV16感染的细胞中,HPV16 E7蛋白存在持续性表达,E7蛋白与肿瘤抑制蛋白Rb蛋白结合,引起细胞内多种蛋白的异常表达,是引起细胞恶性转化的重要原因之一,被认定是HPV16相关肿瘤特异性抗原,也被广泛地认为是HPV16相关肿瘤免疫治疗的理想靶点之一。目前报道HPV16感染相关的临床诊断主要依靠以PCR为主的分子生物学方法,该方法具有设备条件要求高、监测结果假阳性率高等缺点。免疫组化方法则简便、易行。研制和开发简单有效的快速检测HPV单克隆抗体诊断试剂盒对降低HPV感染性疾病的发病率和病死率均具有重要意义。为研究HPV16 E7蛋白在肿瘤早期预报中的作用及研制治疗性疫苗,特制备HPV16 E7的单克隆抗体[方法]将构建成的PGEX4T-1-HPV16 E7质粒转化BL21细菌,在IPTG诱导下,稳定表达GST-HPV16 E7融合蛋白。经IPTG诱导后,采用Western Blot进行鉴定,HPV16 E7重组蛋白的相对分子质量约为37kD。利用亲和层析法从表达产物中纯化出目的蛋白。以纯化的GST-HPV16 E7蛋白为免疫原免疫Balb/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合,采用ELISA双筛,直至检测所有孔均为E7阳性,而GST阴性为止,扩大培养、建株、冻存并制备腹水、单克隆抗体[结果]1.将构建成的PGEX4T-1-HPV16 E7的原核表达载体转化BL21细菌,在IPTG诱导下,能稳定表达GST-HPV16 E7融合蛋白,表达的融合蛋白的分子量约37kD。2.将细胞融合后,采用ELISA法双筛,直至检测所有孔均为E7阳性而GST阴性为止,扩大培养、建株、冻存并制备腹水,腹水产量在3～10ml之间,其效价达10-6。3.成功制备出HPV16 E7单克隆抗体,可在多种肿瘤组织细胞核中染色[结论]该抗体是HPV16 E7蛋白特异性的McAb。本实验通过GST融合蛋白成功制备出针对人乳头瘤病毒HPV16 E7蛋白的特异性单克隆抗体,为今后进一步探索其生物学功能、HPV16 E7的检测及免疫学治疗奠定了基础。

全文目录

中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
缩略词表  11-12
前言  12-14
材料方法  14-29
结果  29-32
讨论  32-46
结论  46-47
参考文献  47-51
致谢  51-52
攻读学位期间发表的学术论文目录  52-53
学位论文评阅及答辩情况  53

人乳头瘤病毒16型E7蛋白单克隆抗体的研制

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