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芹菜素上调CD4~+CD25~+调节性T细胞并抑制哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的研究

作　者: 李红岩
导　师: 周林福
学　校: 南京医科大学
专　业: 内科学
关键词: 哮喘 CD4~+CD25~+Treg细胞气道炎症免疫耐受芹菜素气道重塑 OX40/OX40L MAPK
分类号: R562.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

第一部分芹菜素对急性哮喘模型小鼠气道炎症、气道高反应性和CD4~+CD25~+Treg细胞的影响目的：观察芹菜素对急性哮喘模型小鼠气道炎症、气道高反应性和CD4~+CD25~+Treg细胞的影响。方法：30只SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组、去除CD25芹菜素组、芹菜素组和布地奈德组。OVA致敏和激发。芹菜素腹腔注射，布地奈德混悬液雾化，共9次。末次激发24h后，测定气道反应性，HE染色观察炎性细胞浸润，PAS染色观察杯状细胞增生，ELISA法分别检测血清总IgE、OVA特异性IgE（OVA-sIgE）和BALF中IL-4、IL-13和IFN-γ水平。流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4~+CD25~+Treg细胞水平。结果:随着氯化乙酰胆碱(Ach)浓度的增加，哮喘组小鼠气道阻力（RL）明显增加，正常组仅轻度增加。芹菜素和布地奈德组小鼠RL的增加程度低于哮喘组小鼠（P<0.05），去除CD25芹菜素组与芹菜素组小鼠之间的差异有统计学意义（P<0.05）；在BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞（EOS）计数方面，哮喘组小鼠高于正常组小鼠（P<0.05），芹菜素、布地奈德组小鼠与哮喘组小鼠相比明显降低（P<0.05），去除CD25芹菜素组与芹菜素组小鼠之间的差异有统计学意义（P<0.05）；在BALF中IL-4、IL-13和血清总IgE、OVA-sIgE方面，哮喘组高于正常组（P<0.05），芹菜素、布地奈德组低于哮喘组小鼠（P<0.05），去除CD25芹菜素组与芹菜素组小鼠之间的差异有统计学意义（P<0.05）；在IFN-γ方面，哮喘组低于正常组（P<0.05），芹菜素、布地奈德组高于哮喘组（P<0.05）；去除CD25芹菜素组与芹菜素组小鼠之间的差异有统计学意义（P<0.05）；哮喘组小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg水平低于正常组（P<0.05），芹菜素、布地奈德组小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg水平与哮喘组相比升高（P<0.05），去除CD25芹菜素组与芹菜素组小鼠之间的差异有统计学意义（P<0.05）。结论：芹菜素可抑制哮喘模型小鼠的气道炎症和气道高反应性，这种抑制作用可能与上调CD4~+CD25~+Treg水平，使Th2免疫反应转为免疫抑制有关。第二部分芹菜素对慢性哮喘模型小鼠气道炎症和气道重塑的影响目的：观察芹菜素对慢性哮喘模型小鼠气道炎症和气道重塑的影响并探讨机制。方法：BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、芹菜素组和布地奈德组。OVA致敏，每周3次激发，共12周，芹菜素（20mg/kg/day）腹腔注射，布地奈德混悬液雾化，共12周。末次激发24h后，测定气道反应性，HE染色观察肺组织炎性细胞浸润，PAS染色观察杯状细胞增生，Masson染色观察上皮下纤维化，肺组织进行羟脯氨酸测定观察胶原含量，ELISA检测血清总IgE、OVA-sIgE和BALF中IL-4、IL-13、转化生长因子β1（TGF-β1）和血管内皮生长因子（VEGF）的水平。免疫组化测定气道α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4~+CD25~+Treg细胞和树突状细胞（DC）的水平并检测CD4~+T细胞增殖情况。Western blot观察肺组织OX40、IκBα、核因子κB（NF-κB）及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）蛋白表达。结果:随着Ach浓度的增加，哮喘组小鼠RL明显增加，正常组RL轻度增加，芹菜素组和布地奈德组小鼠与哮喘组小鼠相比有统计学意义(P<0.05)，芹菜素与布地奈德组小鼠之间无统计学意义(P>0.05)；哮喘组小鼠BALF中炎性细胞总数和EOS计数高于正常组(P<0.05)，两治疗组小鼠较哮喘组明显降低(P<0.05)，芹菜素组和布地奈德组之间无差别(P>0.05)；哮喘组BALF中IL-4、IL-13、TGF-β1和VEGF和血清总IgE、OVA-sIgE含量高于正常组(P<0.05)，治疗组低于哮喘组小鼠(P<0.05)，芹菜素和布地奈德组两组之间无差异(P>0.05)；哮喘组小鼠气道PAS阳性上皮细胞数/支气管高于正常组小鼠(P<0.05)，治疗组低于哮喘组小鼠(P<0.05)；哮喘组小鼠支气管Masson染色面积/基底膜周径高于正常组相小鼠(P<0.05)，治疗组明显降低，与哮喘组相比有统计学意义(P<0.05)；哮喘组小鼠肺组织羟脯氨酸含量高于正常组小鼠(P<0.05)，治疗组减低，与哮喘组相比有统计学意义(P<0.05)；哮喘组小鼠支气管α-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径与正常组小鼠相比显著增加(P＜0.05)，治疗组低于哮喘组小鼠(P<0.05)；哮喘组小鼠肺组织PCNA水平高于正常组(P<0.05)，治疗组与哮喘组相比降低(P<0.05)；哮喘组小鼠脾脏中CD4~+CD25~+Treg细胞水平低于正常组(P<0.05)，治疗组能上调CD4~+CD25~+Treg细胞水平(P<0.05)；哮喘组小鼠脾脏中DC水平高于正常组(P<0.05)，治疗组与哮喘组相比降低(P<0.05)；哮喘组小鼠CD4~+T细胞增殖水平高于正常组(P<0.05)，治疗组与哮喘组相比降低(P<0.05)。结论：芹菜素可抑制慢性哮喘模型小鼠的气道炎症、气道高反应性和气道重塑，这种抑制作用可能与上调CD4~+CD25~+Treg细胞水平，抑制DC介导的OX40/OX40配体（OX40L）、MAPK信号途径的激活有关。

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主要英文缩略语词表  5-7
中文摘要  7-10
ABSTRACT  10-14
引言  14-21
第一部分芹菜素对急性哮喘模型小鼠气道炎症、气道高反应性和CD4+CD25+Treg 细胞的影响  21-44
  材料和方法  21-28
  结果  28-41
  讨论  41-44
第二部分芹菜素对慢性哮喘模型小鼠气道炎症和气道重塑的影响  44-86
  材料和方法  44-62
  结果  62-83
  讨论  83-86
小结  86-87
参考文献  87-92
附录  92-93
综述  93-102
  参考文献  99-102
致谢  102

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