学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

PDCD5蛋白抗体制备及其定量检测方法的研究

作　者: 赵素华
导　师: 王云龙
学　校: 河南工业大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: PDCD5蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 45次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


程序化细胞死亡因子5(programmed cell death5，PDCD5)是北京大学人类疾病基因研究中心从白血病细胞株TF-1细胞中克隆得到的一个基因。该基因种属之间进化高度保守，在50多种组织中都有表达，其表达在肿瘤组织中下调，免疫缺陷病上调，和疾病的发生发展紧密相连。因此，PDCD5蛋白的定量检测方法的建立和研究，对PDCD5蛋白的研究和疾病的临床诊断等方面具有重要的现实意义。本研究采用基因工程重组PDCD5蛋白作为免疫原，免疫6～8周BALB/C小鼠，通过细胞融合、有限稀释法筛选获得3株能够稳定分泌抗PDCD5蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为PDCD5-A2、PDCD5-D1、PDCD5-H3，制备腹水并纯化。经鉴定，此三株单克隆抗体的免疫球蛋白均为IgG1,效价达到105以上，具有良好的特异性。用重组PDCD5蛋白免疫新西兰大白兔，制备兔抗PDCD5白蛋多克隆抗体，经琼脂扩散实验检测效价达到1：32。将制备的多克隆抗体经硫酸铵初步纯化后再经层析法对其进一步纯化，经鉴定获得纯度较高的抗体。然后采用高碘酸钠法对单抗和多抗分别进行辣根过氧化物酶（HRP）标记，经双扩散检测标记后的抗体和酶均有活性。用纯化多克隆抗体作为包被抗体，标记的单克隆抗体做为酶标抗体，具有活性。初步建立检测PDCD5蛋白的定量双抗体夹心ELISA检测方法，该检测方法对高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、脂联素、甲胎蛋白、血红蛋白等无交叉反应，具有良好的特异性。用本实验建立的ELISA检测方法检测正常人血清55份、类风湿性关节标本21份和各种癌症标本81份，统计学处理用t检验，结果显示癌症样本血清中PDCD5水平（17.52±4.32ng/ml）显著低于正常人血清（20.43±5.32ng/ml）（P<0.05）；而乳腺癌（17.24±4.30ng/ml）、骨髓瘤（18.04±2.11ng/ml）、食管癌（17.54±1.27ng/ml）和肺癌（18.13±4.26ng/ml）各种癌症患者血清中PDCD5蛋白含量无显著性差异（P>0.05）；类风湿性关节炎样本血清中PDCD5含量（35.94±17.12ng/ml）显著高于正常人血清（P<0.01）具有统计学意义。本研究以重组蛋白免疫BALB/C鼠和新西兰大白兔制备单克隆抗体和多克隆抗体，初步建立了PDCD5蛋白的定量双抗体夹心ELISA检测方法，并利用本方法探讨血清PDCD5含量变化与疾病的相关性，为疾病的辅助诊断提供一种新的方法。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
主要符号表  10-11
第一章 前言  11-20
  1.1 PDCD5 概述  11-14
    1.1.1 PDCD5 基因分子特性  11-12
    1.1.2 PDCD5 蛋白的分子特性  12-14
  1.2 PDCD5 与疾病的相关性  14-16
    1.2.1 PDCD5 与肿瘤  14-15
    1.2.2 PDCD5 与免疫缺陷病  15
    1.2.3 PDCD5 的SNP与疾病  15-16
  1.3 PDCD5 与药物的相关性  16-18
  1.4 PDCD5 的检测方法研究进展  18
  1.5 本研究目的与意义  18-20
第二章 材料和方法  20-38
  2.1 材料  20-26
    2.1.1 临床标本  20
    2.1.2 抗体制备、纯化和鉴定所需试剂及设备、  20-22
    2.1.3 标记抗体制备、鉴定所需试剂及设备  22-23
    2.1.4 ELISA所用试剂及缓冲液  23-26
  2.2 方法  26-38
    2.2.1 单克隆抗体制备  26-32
    2.2.2 兔抗PDCD5 蛋白多抗的制备  32-34
    2.2.3 双抗体夹心ELISA检测体系的初步建立及应用  34-38
第三章 结果与分析  38-52
  3.1 小鼠血清效价检测  38
  3.2 筛选用间接ELISA检测方法的初步建立  38-39
    3.2.1 最佳包被浓度及酶结合物浓度的确定  38-39
    3.2.3 阴阳性结果的判定  39
  3.3 杂交瘤细胞的筛选  39
  3.4 单克隆抗体分泌稳定性实验  39-40
  3.5 腹水效价测定  40
  3.6 单克隆抗体亚型鉴定  40-41
  3.7 单抗特异性鉴定  41
  3.8 单抗纯度和浓度鉴定  41-42
  3.9 兔血清效价检测  42-43
  3.10 多克隆抗体纯化及纯度鉴定  43-44
  3.11 抗体免疫印迹实验  44
  3.12 双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立  44-52
    3.12.1 双抗体夹心ELISA法检测模式的确定  44-45
    3.12.2 包被抗体浓度与酶标工作浓度的初步确定  45
    3.12.3 包被体系的研究  45-46
    3.12.4 封闭体系的研究  46-47
    3.12.5 酶标抗体稀释液的研究  47-48
    3.12.6 最佳包被抗体浓度与酶标浓度的确定  48
    3.12.7 标准曲线  48-49
    3.12.8 交叉反应实验  49
    3.12.9 稳定性试验  49
    3.12.10 精密性实验  49-50
    3.12.11 与同类试剂盒对比实验  50
    3.12.12 初步临床应用  50-52
第四章 讨论  52-55
  4.1 动物免疫  52
  4.2 细胞融合  52-53
  4.3 抗体纯化  53-54
  4.4 线性区间的选取  54-55
第五章 结论  55-56
参考文献  56-62
致谢  62-63
个人简历及在学习期间发表的学位论文  63

相似论文

  1. 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
  2. STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选,R373
  3. 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
  4. 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
  5. 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定,S852.65
  6. 华东地区鸭圆环病毒感染流行病学调查及其单克隆抗体的制备,S858.32
  7. 猪TNF-α单克隆抗体制备与PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞TNF-α变化规律研究,S858.28
  8. cPL双抗体夹心ELISA检测犬急性胰腺炎方法的建立与应用,S858.292
  9. 甲型H1N1流感病毒（2009）HA蛋白的原核表达及酶免检测研究,R392.1
  10. VEGF单克隆抗体对人舌癌细胞Tca-8113及移植瘤的生长影响,R739.88
  11. 环孢素A单克隆抗体的研制,R392
  12. Tca8113-4-1BBL细胞联合CD28单抗在口腔鳞癌免疫中的作用,R392
  13. 骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性心肌梗死后心肌细胞凋亡的影响,R542.22
  14. hGH单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测法的建立,R446.6
  15. 人TLT-2基因转染细胞株的构建及其单克隆抗体的研制,R392
  16. 三聚氰胺单克隆抗体制备及间接竞争ELISA方法的初步建立,S859.84
  17. 甲型流感病毒M2蛋白的表达、纯化及其免疫原性的研究,R392
  18. 鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立,S943
  19. 鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其鉴定,S858.31
  20. 甲型H1亚型流感病毒检测方法的建立及应用,S855.3
  21. 日本血吸虫重组蛋白rSjGST的表达纯化及单克隆抗体的制备和特性鉴定,R392

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
© 2012 www.xueweilunwen.com