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微小按蚊种群群体遗传学特征研究

作　者: 郑重
导　师: 赵彤言
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 病原生物学
关键词: 微小按蚊 Kdr 栖息习性 嗜血习性 群体遗传学 微卫星
分类号: R384.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


微小按蚊是我国重要的疟疾传播媒介，室内滞留喷洒和拟除虫菊酯杀虫剂浸泡蚊帐是重要的防治措施，我国云南一直在应用该化学方法防制。有报道称已发现微小按蚊对拟除虫菊酯杀虫剂产生了抗药性，有研究认为我国云南的微小按蚊A和C型吸血行为和栖息行为也有所差异，但更进一步的行为差异，特别是应用杀虫剂之后，在杀虫剂压力下微小按蚊对杀虫剂抗药性与吸血和栖息行为的关系，还有待于深入研究。1.微小按蚊分子分型微小按蚊复合组成员，以及几种亲缘相近的蚊种具有相近的外形特征，在外形上容易混淆，形态学鉴定容易出现错误。该复合组迄今已记录有微小按蚊A、B、C、D、E，我国云南南部主要为A型、C型，近年也有A/C混合型微小按蚊的报道。先对做采集的蚊虫进行形态学分型，再用PCR方法对捕获的微小按蚊进行分子分型。An. minimus A364只，An. minimus C593只，An. jeyporiensis19只，An.aconitus15只，另有2只疑似为微小按蚊A/C混合型，54只不是微小组按蚊种团成员。2.微小按蚊栖息习性研究在东方红村选取若干牛圈和人房为采样点，使用诱蚊灯采集成虫，每日19:00挂灯开始采集，次日8:00收集蚊虫。对各个诱蚊灯所采集蚊虫进行分别计数。经过spss软件统计分析得出结论An. minimus A偏好栖息人房；而An. minimus C偏好栖息于牛圈。3.微小按蚊吸血习性研究根据东方红村的实际情况调查当地的主要动物血源为牛、猪和鸡，再加上人血源，设计特异性引物，鉴别捕获蚊虫胃血来源。结果经spss软件分析，An.minimus A无明显的吸血偏好；而An. minimus C偏好吸食牛血。4.微小按蚊钠通道基因序列研究登录GenBank可以查询到An. minimus钠离子通道部分编码序列区(CDS)片段序列（GenBank: GU064930.3）和para型钠离子通道基因序列（GenBank:EU155386.1）。根据para型钠离子通道基因序列设计引物扩增An. minimus的ⅡS6区段序列并测序，共测序微小按蚊736只，其中415只测序结果理想，比对结果显示在常见kdr突变的1014位点并没有发现突变，提示该地区微小按蚊的击倒抗性很低或并没有产生击倒抗性。5.微卫星位点多样性检测结果及分析登录GenBank可以查询到An. minimus已有28条微卫星序列，编号为：HQ839797.1、HQ839799.1、HQ839801.1、HQ839803.1、HQ839797.1、HQ839795.1、HQ839793.1、 HQ839793.1、 HQ839789.1、 HQ839816.1、 HQ839814.1、HQ839810.1、 HQ839812.1、 HQ839808.1、 HQ839806.1、 HQ839804.1、HQ839802.1、 HQ839802.1、 HQ839798.1、 HQ839796.1、 HQ839794.1、HQ839792.1、HQ839792.1、HQ839815.1、HQ839813.1。根据以上序列设计引物，其中AM4、AM7-1、AM8、AM12、AM21、AM23、AM25-1和AM27-1，八个位点扩增出清晰的条带，测序结果理想，可用于微卫星数据分析。将采集蚊虫分为八个组：A组为An. minimusA（云南东方红村），B组为An. minimus C（云南东方红村），C组为An. jeyporiensis（云南龙塘村），D组为An.aconitus（海南牙营村），E组为An. aconitus（云南龙塘村），F组为An. minimusA（云南龙塘村），G组为An. minimus C（云南龙塘村），H组为An. minimus A（海南牙营村），用微卫星标记对这些组的期望杂合度与观察杂合度、多态性信息含量、哈迪-温伯格平衡分析、群体内的近交系数、群体分化系数等多方面分析，并对微小按蚊种团进行聚类。各个位点期望杂合度与观察杂合度的值非常相似，说明这些标记具有良好的多态性，适用于群体分析。实验用8个按蚊种群间的生物多样性很好，各个位点的平均多态信息含量处于0.53～0.77之间，云南龙塘村捕获的An.aconitus遗传多样性略低，但都>0.5，仍然比较丰富。哈迪-温伯格平衡检验结果各种群存在多位点的杂合子缺失，偏离了哈迪-温伯格平衡标准，总的群体遗传分化系数Fst=0.1386，各种群之间基因交流较少。聚类分析结果表明同种之间距离接近，微小按蚊A型、C型与乌头按蚊距离接近，与杰普尔按蚊距离较远，符合微小按蚊种团的基本情况。

全文目录


中文-外文缩略语对照表  4-5
摘要  5-8
Abstract  8-11
前言  11-14
材料与方法  14-24
  1.实验材料  14-15
  2.试验方法  15-24
结果  24-43
  1. 微小按蚊分子分型  24-25
  2. 微小按蚊栖息习性研究  25-27
  3. 微小按蚊吸血习性研究  27-31
  4. 微小按蚊钠通道基因序列研究  31-34
  5. 微卫星位点多样性检测结果及分析  34-43
讨论  43-46
结论  46-47
参考文献  47-53
综述  53-61
  参考文献  58-61
个人简历  61-62
致谢  62

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学寄生虫学 > 医学昆虫学 > 蚊、白蛉
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