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运用Identifiler试剂盒对硅珠法提取石蜡包埋组织DNA质量的评估

作　者: 林旭
导　师: 冀强
学　校: 南京医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 石蜡包埋组织 DNA 硅珠提取法经典有机提取法
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

研究已证实DNA是人类主要遗传物质，但人类基因组并非人们所想的那样稳定。诸如基因重排、扩增、缺失、突变和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表达和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。因此自从James Dewey Watson和Francis Crick发现DNA双螺旋结构以来，伴随着现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸多领域，机体的生理与病理状态研究主要集中在DNA水平变化上的研究。DNA各级结构、理化性质、功能就成为医学界的研究热点。许多遗传性疾病﹑肿瘤与DNA变化关系密切。为进一步研究DNA这些变化引起的相应病理结果，许多研究者选择细胞、动物模型等进行相关疾病研究。近年来，石蜡包埋组织逐渐成为新的研究选材。Goelz(1985)和Dubeau等（1986）成功地从蜡块中提取出高质量的DNA，完全可以满足某些肿瘤分子生物学研究的需要，结束了DNA研究依赖于新鲜或冰冻的材料，在诊断与鉴别诊断研究和患者预后评估等方面均具有重要价值。病理科石蜡包埋组织成为获取DNA的研究材料有很多自身优势。蜡块包埋的组织是手术标本，直接来自于个体，能最直接根本的反映其疾病变化；对于肿瘤性疾病，取材时要同时取肿瘤及正常组织，在研究时就有很好的对照组；石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织形态变化的主要方法。经过一系列处理后组织块可在包埋石蜡中永久保存，就可以获取大量样本，成为很好的回顾性研究材料，以便相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。文献也报道过蜡块包埋组织有一定的局限性。制片过程中要经酒精和二甲苯等有机溶剂处理，因此很易造成组织内抗原性的丧失。研究也表明，固定剂的类型直接影响DNA的提取质量；随着固定时间延长，DNA碱基与组蛋白之间的甲基交联产生的越多，获取的DNA就会变少；固定剂成分、浓度、酸碱度以及温度等因素对DNA提取也会有一定的影响。众多因素的影响，从石蜡包埋组织中获取高质量及大分子量DNA成为亟待解决的问题。文献报道硅珠提取法常用于高度腐败及微量检材的DNA提取，但用于石蜡包埋组织的提取文献少见报道。本实验结合硅珠法具有高吸附DNA特性的优点，运用到石蜡包埋组织中提取DNA。结果显示硅珠法提取的DNA效果经统计学计算，优于有机法提取，且得到的DNA分子量也优于有机法法。因此，本实验从获取石蜡包埋组织中高质量的DNA角度进行实验，探讨各种方法对DNA提取的效果的评估，希望以此为今后的研究提供一些基础资料。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-12
材料方法  12-16
结果  16-25
讨论  25-28
结论  28-29
参考文献  29-32
综述福尔马林固定后 DNA 的性质变化及常用提取方法  32-40
  参考文献  37-40
综述 DNA 定量技术在死亡时间推断中的研究进展  40-51
  参考文献  48-51
攻读学位期间发表文章情况  51-52
致谢  52

运用Identifiler试剂盒对硅珠法提取石蜡包埋组织DNA质量的评估

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