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多疣壁虎提取物抗肿瘤作用研究

作　者: 王悦怡
导　师: 高波
学　校: 吉林大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 多疣壁虎 提取物 抗肿瘤作用
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


本文分离多疣壁虎提取物，分别探讨其体外对食道癌细胞株CaEs-17、肝癌细胞株QGY-7701的增殖抑制作用及机理；体内对H22、ECA腹水瘤小鼠生命延长率，以及对S180、H22实体瘤小鼠瘤重的影响。首先，提取多疣壁虎60%醇提物Ⅰ、生物碱样物质Ⅱ，显色反应证实提取物Ⅱ含有生物碱成分。由生物碱样物质Ⅱ分离提取物A、B，显色反应证实其均含有生物碱成分，并用HPLC分析其分离效果。其次，体外细胞实验中，通过MTT法检测分离得到的2种提取物对癌细胞的增殖抑制作用，结果表明多疣壁虎60%醇提物Ⅰ、生物碱样物质Ⅱ能显著抑制肝癌细胞株QGY-7701、食道癌细胞株CaEs-17生长，且都具有时间、剂量依赖性。药物处理72h后，流式细胞仪检测提取物对癌细胞的促凋亡作用，证实提取物Ⅰ、Ⅱ （800μg/mL、100μg/mL、12.5μg/mL）具有诱导癌细胞凋亡的作用，提取物Ⅰ对CaEs-17、QGY-7701细胞的凋亡率分别为72.24%、53.61%、45.69%和67.75%、22.19%、18.41%，提取物Ⅱ的凋亡率分别为60.59%、48.27%、34.67%和43.54%、20.99%、14.68%。显微镜下观察药物处理后癌细胞形态变化，结果表明QGY-7701细胞贴壁能力降低、碎片增加、状态明显变差。Western Blot分析提取物Ⅰ、Ⅱ对QGY-7701细胞Bax、Bcl-2基因表达情况的影响，结果表明药物处理48h后， Bcl-2基因的表达随着药物浓度的增加而明显降低，但对Bax基因的表达没有显著影响，这可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的作用机理。最后，体内建立腹水型、实体瘤小鼠模型，检测提取物Ⅰ对H22、ECA腹水瘤小鼠生存时间的影响，以及对S180、H22实体瘤小鼠瘤重的影响。实验表明提取物Ⅰ可以延长H22、ECA腹水瘤小鼠的生存时间，降低S180、H22实体瘤小鼠瘤重。

全文目录


中文摘要  4-5
Abstract  5-11
第一章 前言  11-26
  1.1 壁虎研究概况  11-23
    1.1.1 临床应用  11-19
    1.1.2 壁虎抗肿瘤药理作用研究  19-22
    1.1.3 壁虎化学成分研究  22-23
  1.2 动物药生物碱研究概况  23-24
  1.3 研究目的及意义  24-26
第二章 多疣壁虎生物碱粗提物提取  26-34
  2.1 引言  26
  2.2 仪器与试剂  26-28
    2.2.1 药品  26
    2.2.2 仪器  26-27
    2.2.3 试剂  27
    2.2.4 溶液配制  27-28
  2.3 实验方法  28-30
    2.3.1 生物碱鉴别方法  28
    2.3.2 壁虎生物碱粗提物的粗提  28-29
    2.3.3 壁虎生物碱样物质纯化  29
    2.3.4 生物碱粗品 HPLC 测定  29-30
  2.4 实验结果与讨论  30-33
    2.4.1 壁虎生物碱粗提物的粗提  30
    2.4.2 壁虎生物碱样物质纯化  30-31
    2.4.3 生物碱粗品 HPLC 测定  31-33
  2.5 本章小结  33-34
第三章 多疣壁虎粗提物体外药理学研究  34-56
  3.1 引言  34
  3.2 仪器与试剂  34-38
    3.2.1 药品  34
    3.2.2 仪器  34-35
    3.2.3 试剂  35-36
    3.2.4 溶液配制  36-38
  3.3 实验方法  38-44
    3.3.1 细胞培养  38
    3.3.2 多疣壁虎提取物Ⅰ、Ⅱ对肿瘤细胞增殖的影响  38-39
    3.3.3 流式细胞仪检测壁虎提取物Ⅰ、Ⅱ对肿瘤细胞凋亡影响  39-41
    3.3.4 Western blot 分析 Bax、Bcl-2 蛋白的表达  41-44
  3.4 实验结果与讨论  44-55
    3.4.1 壁虎提取物Ⅰ、Ⅱ对肿瘤细胞增殖的影响  44-48
    3.4.2 流式细胞仪检测壁虎提取物Ⅰ、Ⅱ对肿瘤细胞凋亡影响  48-54
    3.4.3 Western Blot 分析 Bax、Bcl-2 蛋白表达的检测  54-55
  3.5 本章小结  55-56
第四章 多疣壁虎提取物体内抗肿瘤作用研究  56-61
  4.1 引言  56
  4.2 仪器与试剂  56
  4.3 实验方法  56-57
    4.3.1 小鼠模型的建立  56
    4.3.2 壁虎提取物Ⅰ对腹水瘤小鼠存活时间的影响  56-57
    4.3.3 壁虎提取物Ⅰ对实体瘤小鼠瘤重的影响  57
    4.3.4 数据处理  57
  4.4 实验结果与讨论  57-60
    4.4.1 壁虎提取物Ⅰ对腹水瘤小鼠存活时间的影响  57-58
    4.4.2 壁虎提取物Ⅰ对实体瘤小鼠瘤重的影响  58-60
  4.5 本章小结  60-61
第五章 总结与展望  61-63
  5.1 总结  61
  5.2 展望  61-63
参考文献  63-69
致谢  69

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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