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仿刺参(Apostichopus japonicus)中HolotoxinA_1的定量分析及不同海参的皂苷特征图谱研究
作 者: 张然
导 师: 吕志华
学 校: 中国海洋大学
专 业: 药物化学
关键词: 海参皂苷 HolotoxinA1 定量分析 高效液相-蒸发光散射检测器 液质联用
分类号: R284
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
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海参(sea cucumbers,Holothurians)属棘皮动物门(Echinodermate)海参纲(Holothurioidea)动物,具有较高的食用与药用价值。其体内的海参皂苷是最重要的活性物质之一,具有抗肿瘤、抗菌、溶血、免疫调节等广泛药理作用,是评价海参质量的关键指标之一。由于受分类和生长环境的影响,不同海参所含皂苷结构及比例有所不同。本论文结合HPLC-ELSD、HPLC-MS技术建立了海参皂苷分析及鉴定方法,并利用该方法对食用、药用海参中品质最高的仿刺参皂苷进行了质量评价,建立了多种海参的海参皂苷特征图谱。从而弥补了多年来海参皂苷缺乏标准品难以定量的空白,为海参质量评价及不同海参的判别、归属提供可靠方法和理论依据,对建立海参全面、规范的质量标准具有现实指导意义。本论文主要包括以下两部分:采用60%乙醇,75℃回流对新鲜仿刺参中海参皂苷进行提取,应用有机溶剂萃取法、大孔树脂吸附法及HPLC对仿刺参中的HolotoxinA1进行分离纯化,通过波谱数据确定分离制备的海参皂苷单体为三萜皂苷HolotoxinA1,HPLC-ELSD分析其纯度可作为对照品。采用ODS-SPE小柱对不同海域仿刺参样品进行前处理,以Hypersil Gold C18(150mm×2.1mm,3μm)色谱柱,5mmol L-1醋酸铵—乙腈溶液梯度洗脱建立海参皂苷HolotoxinA1的HPLC-ELSD定量分析方法,并对不同海域仿刺参中HolotoxinA1的含量进行了定量比较。研究表明建立的HPLC-ELSD方法基线稳定,灵敏度高,各色谱峰分离良好,在0.2μg mL-125μg mL-1线性关系良好(r=0.999),检测限为0.05μg mL-1,具有良好的重复性和可靠性。定量分析可知来源于不同海域的5种仿刺参中HolotoxinA1含量有较大差别,仿刺参中HolotoxinA1含量由南向北依次提高,以韩国东海岸产仿刺参中含量最多(588.20μg g-1),福建产仿刺参中含量最少(21.33μg g-1)。本部分建立了一种准确、灵敏的评价仿刺参中海参皂苷质量的方法,解决了多年来海参皂苷因成分复杂难以分析,缺乏对照品难以定量等问题,为今后海参产品的质量评价提供了依据。根据所建立的海参皂苷制备及分析方法,采用HPLC-MS技术,对2种刺参科(Stichopodidae)海参和3种海参科(Holothuriidae)海参进行分析,通过HPLC-MS色谱峰中的每个分子离子峰,推断它们可能存在的海参皂苷化合物,建立了不同海参的海参皂苷特征图谱。5种海参受海域与生长环境影响,其皂苷组成与含量有较大差别,同一科海参的海参皂苷组成具有一定相似性又有其独特性,证实了其分类学上的亲缘性。为快速鉴定检测海参皂苷、判别海参种属、发现新颖海参皂苷、评价海参质量提供科学依据。
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全文目录
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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