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蚬壳花椒果皮有效成分筛选及活性研究

作　者: 邵文斌
导　师: 杨林
学　校: 兰州理工大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 蚬壳花椒多糖抑菌提取工艺抗肿瘤
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

蚬壳花椒（Zanthoxylum dissitum Hemsl.）属芸香科花椒属攀援藤本植物，根、茎及叶均可人药，临床上有祛风活络、散瘀止痛、解毒消肿之功效，民间用于治疗腰腿疼痛、关节疼痛、跌打损伤等症，为了更好地开发和利用我国蚬壳花椒植物资源，本文对甘肃省陇南产的蚬壳花椒果皮多糖抗肿瘤活性进行了研究。首先对蚬壳花椒果皮化学成分进行了预实验，分别采用不同试剂和薄层层析法进行试验，结果表明其中含有生物碱、皂苷、黄酮及其苷、强心苷、蒽醌及其苷、糖及其苷、挥发油、油脂、有机酸、氨基酸、蛋白质，不含鞣质和酚类、香豆素、萜类内酯化合物、甾体及萜类化合物。其次对蚬壳花椒果皮总多糖、总生物碱和总皂苷的生物学活性进行了初步研究：（1）采用滤纸圆片法研究了它们对4种供试细菌株（肺炎克雷伯菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）的抑制活性，结果表明，蚬壳花椒果皮总皂苷对四种供试菌均无抑制作用；总多糖在浓度为10mg/mL时对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有抑制作用，总生物碱在浓度为10mg/mL时对四种供试菌均有不同程度的抑菌作用。（2）采用MTT法研究了它们对人肝癌细胞Hep-G2的抑制作用，结果表明，蚬壳花椒果皮总皂苷对人肝癌细胞Hep-G2无抑制作用，总多糖和总生物碱对人肝癌细胞Hep-G2的生长具有抑制活性，其中总多糖的抑制活性最强。鉴于蚬壳花椒果皮多糖具有良好的抗肿瘤活性，本文应用响应面分析法对蚬壳花椒果皮总多糖的提取工艺进行研究，在单因素实验基础上选取实验因素与水平，根据中心组合（Box-Benhnken）设计原理采用三因素三水平的响应面分析法，得到多元二次线性回归方程，以多糖提取率为响应值作响应面和等高线，确定蚬壳花椒果皮总多糖的最佳提取工艺为：以蒸馏水为提取溶剂，提取温度94℃、液料比82︰1、提取时间146min、提取2次，在此条件下多糖提取率可达4.99%。以MTT法和移植性H22实体荷瘤小鼠为模型，检测不同剂量蚬壳花椒果皮多糖的体内外抗肿瘤作用。结果表明当样品浓度为62.5～1000μg·mL^-1范围内，对体外培养的Hela、SMMC-7721、Hep-G2三株肿瘤细胞增殖均有抑制作用，且呈现出一定的浓度依赖关系，IC50依次为460.9μg·mL^-1、425.6μg·mL^-1、570.4μg·mL^-1，体内实验表明，蚬壳花椒果皮多糖高(1.5g·kg^-1)、中(0.75g·kg^-1)、低(0.375g·kg^-1)剂量组均能抑制荷瘤小鼠瘤块的生长，抑瘤率依次为41.55%、34.96%、33.71%；通过肿瘤组织病理学切片观察，同样显示蚬壳花椒果皮多糖具有较好的抗肿瘤作用。比较给药后荷瘤小鼠的肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数后发现，蚬壳花椒果皮多糖毒副作用小，增强免疫功能免疫。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-10
第一章绪论  10-21
  1 蚬壳花椒概述  10-19
    1.1 蚬壳花椒植物概述  10-11
    1.2 蚬壳花椒化学成分研究  11-14
    1.3 蚬壳花椒各器官药材性状及药用价值  14-18
    1.4 蚬壳花椒资源开发与利用  18-19
  2 立题依据及意义  19-21
第二章蚬壳花椒化学成分预实验  21-29
  1 引言  21
  2 实验部分  21-26
    2.1 实验材料  21-22
    2.2 实验方法  22-26
  3 结果与讨论  26-29
    3.1 预实验结果  26-28
    3.2 讨论  28-29
第三章蚬壳花椒果皮总生物碱、总皂苷和总多糖抑菌及抗肿瘤活性筛选  29-42
  1 引言  29
  2 实验部分  29-35
    2.1 实验材料  29-30
    2.2 试验方法  30-35
  3 结果与分析  35-40
    3.1 蚬壳花椒果皮各类化学成分提取结果  35-36
    3.2 抗肿瘤活性试验结果  36-37
    3.3 抑菌实验结果  37-40
  4 结论  40-42
第四章响应面法优化蚬壳花椒果皮多糖提取工艺  42-53
  1 引言  42
  2 材料与方法  42-43
    2.1 材料与仪器  42-43
  3 实验方法  43-44
    3.1 水提醇沉法提取蚬壳花椒总多糖工艺流程  43
    3.2 蚬壳花椒果皮多糖含量测定  43-44
    3.3 单因素试验  44
  4 结果与讨论  44-52
    4.1 标准曲线的制备  44-45
    4.2 单因素试验  45-48
    4.3 采用响应面分析法对蚬壳花椒多糖提取工艺的优化  48-52
    4.4 模型的验证  52
  5 结论  52-53
第五章蚬壳花椒果皮总多糖体内外抗肿瘤作用研究  53-63
  1 引言  53
  2 材料  53-54
    2.1 药材  53-54
    2.2 瘤株与实验动物  54
    2.3 仪器与试剂  54
  3 实验方法  54-57
    3.1 水提醇沉法提取蚬壳花椒总多糖工艺流程  54-55
    3.2 蚬壳花椒果皮多糖含量的测定  55
    3.3 体外抗肿瘤试验（MTT 法）  55-56
    3.4 体内抑瘤试验  56-57
  4 实验结果  57-61
    4.1 蚬壳花椒果皮多糖含量测定  57-58
    4.2 蚬壳花椒果皮多糖对 Hela、SMMC-7721 和 Hep-G2 肿瘤细胞增殖的影响  58-59
    4.3 蚬壳花椒果皮多糖体内抗肿瘤作用  59-61
  5 讨论  61-63
第六章结语  63-65
  1 本论文的主要研究内容、结果及其意义  63-64
  2 展望  64-65
参考文献  65-69
致谢  69-70
附录 A 攻读硕士学位期间所发表的学术论文  70

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