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UPT十通道免疫层析技术在食源性致病菌多重检测中的应用

作　者: 王浩然
导　师: 周蕾; 杨瑞馥
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 军事预防医学
关键词: 上转换发光 免疫层析技术 多重检测 食源性致病菌
分类号: R155.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 45次
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内容摘要


目的:将上转换发光(Up-Converting Phospher, UCP)材料作为标记物与经典免疫层析试纸相结合,在此基础上利用十通道免疫层析试纸盘的独特设计,研制可对十种食源性致病菌(大肠杆菌O157、甲型副伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、霍乱弧菌O1、霍乱弧菌O139、副溶血弧菌)进行多重检测的UPT十通道免疫层析试纸盘,从而满足食品安全检测中对于病原体多重快速筛查的需求。方法:[1] UPT单靶标检测试纸的研制与实验室评价:以每种食源性致病菌相应的单抗作为特异性生物探针、以UCP颗粒作为标记物、以双抗体夹心作为检测模型,依次研制10种食源性致病菌对应的基于上转换发光技术(Up-converting Phosphor Technology, UPT)的单靶标检测试纸;以各种病原体的系列浓度标准菌悬液作为样品,评价各试纸的包括定量能力、灵敏度、特异性在内的检测性能;[2] UPT十通道免疫层析试纸盘的研制与实验室评价:将针对10种食源性致病菌的10种UPT单靶标检测试纸,通过条件优化以及兼容性调整,整合入UPT-LF十通道试纸盘,利用UPT十通道生物传感器对数据信息进行自动分析,实现一个样品中10种食源性致病菌的同步检测;通过“单通道与十通道检测一致性评价”、“单个通道的同步联检特异性评价”和“多个通道之间的同步联检兼容性评价”,对UPT试纸盘的同步检测能力、特异性、抗干扰性进行综合评价;[3] UPT十通道免疫层析系统现场评价:利用2010年上海世博期间上海出入境检验检疫局的“分离培养阴性的食品样本(5类279份)”以及“阴性掺菌样品”,对UPT十通道免疫层析系统的食品中食源性致病菌综合检测性能进行评价。结果:[1] UPT单靶标检测试纸的研制与实验室评价:10种UPT单靶标检测试纸均具有良好的线性定量检测能力,线性拟合决定系数R2位于0.9-0.99之间。检测灵敏度均可以满足食物样本增菌检测和腹泻样本直接检测的需求;[2] UPT十通道免疫层析试纸盘的研制与实验室评价:成功研制了可以同时快速检测10种食源性致病菌的UPT-LF十通道试纸盘,各种评价结果显示,其同步检测能力、特异性、抗干扰均可满足食源性致病菌多重检测的需求;[3] UPT十通道免疫层析系统现场评价:分菌培养阴性的食品样本(5类279份),没有非特异出现;阴性掺菌样品中的菌量小于10CFU时UPT-LF十通道系统检测阳性率不理想,对培养基养分的调节是提高检出率的关键环节;结论:UPT-LF十通道系统可在保证敏感性与特异性的前提下,实现对10种食源性致病菌的多重检测。食物样品成分(如防腐剂等)、细菌培养性能,会对检测造成一定的影响。

全文目录


缩略词  4-5
摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
第一部分 前言  9-12
第二部分 UPT 单靶标菌体检测试纸的研制及性能评价  12-44
  2.1 引言  12-17
  2.2 实验材料  17-18
  2.3 试纸制备方法  18-20
  2.4 试纸的性能评价方法  20-23
    2.4.1 试纸检测线性和灵敏度评价  22
    2.4.2 试纸检测特异性评价  22-23
  2.5 实验结果  23-43
    2.5.1 大肠杆菌 O157 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  23-24
    2.5.2 甲型副伤寒沙门氏菌 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  24-26
    2.5.3 乙型副伤寒沙门氏菌 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  26-28
    2.5.4 丙型副伤寒沙门氏菌 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  28-30
    2.5.5 伤寒沙门氏菌 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  30-32
    2.5.6 肠炎沙门氏菌 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  32-34
    2.5.7 猪霍乱沙门氏菌 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  34-36
    2.5.8 霍乱弧菌 O1 群 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  36-38
    2.5.9 霍乱弧菌 O139 群 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  38-40
    2.5.10 副溶血弧菌 UPT 单通道免疫层析试纸检测性能评价结果  40-42
    2.5.11 结果综合  42-43
  2.6 结果讨论  43-44
第三部分 UPT 十通道免疫层析试纸盘的研制及性能评价  44-59
  3.1 引言  44-47
  3.2 实验材料  47-48
  3.3 十通道试纸盘的制备方法  48-50
  3.4 试纸盘的性能评价方法  50-51
  3.5 试纸盘的性能评价结果  51-58
  3.6 结果讨论  58-59
第四部分 食品安全现场样本检测  59-66
  4.1 引言  59
  4.2 实验材料  59-60
  4.3 实验方法  60-61
  4.4 实验结果  61-65
  4.5 结果讨论  65-66
第五部分 结果与讨论  66-68
  一.通过本课题所进行的系统研究,主要获得了以下结果  66
  二.讨论  66-68
综述  68-73
参考文献  73-76
个人简历  76-77
致谢  77

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 营养卫生、食品卫生 > 饮食卫生与食品检查 > 食品卫生与检验
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