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芦笋皂苷的提取、纯化及其溶血活性研究

作　者: 张若洁
导　师: 潘思轶
学　校: 华中农业大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 芦笋皂苷超声波辅助提取工艺大孔树脂纯化溶血性结构
分类号: TQ464
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

芦笋皂苷是一类具有环戊烷多氢菲母核结构的物质,其具有多种生物活性,高效的提取工艺和纯化工艺可为开发芦笋皂苷类药物和保健品奠定良好的基础。但芦笋皂苷属于甾体皂苷,甾体皂苷通过静脉注射作为药物使用时,会有溶血现象,这一特性大大限制了芦笋皂苷的应用。本文主要研究了芦笋皂苷含量测定的方法,提取纯化工艺,并通过体外实验对其溶血进行了评价,以及初步探讨了芦笋皂苷的结构。通过上述实验,得出以下结论：1、建立测定芦笋总皂苷含量的分光光度测法,选用菝葜皂苷元为对照品,比较硫酸-甲醇法、香草醛-高氯酸-冰醋酸法以及高氯酸法三种不同显色剂对芦笋皂苷反应适宜性,选用高氯酸法为芦笋总皂苷的含量测定方法。在310nm下,芦笋总皂苷及菝葜皂苷元均有最大吸收,菝葜皂苷元在72～216μg范围内有良好线性关系。此方法简便、准确,适合于芦笋总皂苷含量的测定。2、采用Box-Behnken设计和响应面分析法,对芦笋总皂苷的超声辅助提取工艺进行优化。以提取温度、提取时间及超声功率为自变量,芦笋总皂苷得率为响应值,研究各自变量及其交互作用对超声波辅助提取法提取芦笋总皂苷得率的影响。结果表明：最佳工艺条件为乙醇浓度95%、提取温度71℃、提取时间23min、超声波功率70W、提取次数2次,在此条件下获得总皂苷的提取率为23.96mg/g。3、采用静态及动态吸附解吸试验优选适宜于芦笋皂苷纯化的大孔树脂并优化纯化条件。结果表明：S-8型树脂对芦笋皂苷有较好的吸附和洗脱效果,并具有良好的脱色效果,其最佳纯化条件为：上样浓度1mg/mL,上样量60ml/g树脂,用pH=7的75%的乙醇洗脱,洗脱剂用量为10mL/g树脂。纯化后得提取物中芦笋皂苷的纯度可达50.15%,脱色率为92.23%。4、本文采用肉眼观察法和分光光度法两种方法对芦笋皂苷的溶血性进行了评价。实验结果表明,芦笋皂苷的溶血性具有剂量依赖性,芦笋皂苷在浓度低于25 ug·mL-1时,溶血率<5%,作为注射用药不会引发溶血现象。5、本文通过泡沫实验、Libermannn Burchard反应、Ehrish试剂反应、以及红外光谱图谱共同鉴定表明芦笋皂苷具有甾体皂苷的母核结构,并属于开环的呋喃型甾体皂苷类。

全文目录

摘要  8-9
Abstract  9-11
第一章文献综述  11-30
  1 皂苷类化合物的提取方法  12-13
    1.1 传统热提法  12
    1.2 微波辅助提取法  12
    1.3 超声波辅助提取法  12-13
    1.4 超高压辅助提取法  13
  2 皂苷类化合物的纯化  13
  3 皂苷类化合物的分离  13-14
    3.1 柱层析分离法  13-14
    3.2 高速逆流色谱分离法  14
  4 芦笋皂苷的生理活性  14-16
    4.1 芦笋皂苷的抗菌活性  15
    4.2 芦笋皂苷的抗肿瘤活性  15-16
  5 芦笋甾体皂苷的结构和性质  16-28
    5.1 甾体皂苷的结构及鉴定  16-18
    5.2 芦笋中甾体皂苷的结构  18-28
  6 课题研究的目的和意义  28
  7 课题的研究内容及创新之处  28-30
    7.1 课题的研究内容  28
    7.2 论文创新之处  28-30
第二章芦笋总皂苷含量测定的方法学研究  30-37
  1 材料与方法  30-32
    1.1 材料  30
    1.2 主要试剂  30
    1.3 主要仪器  30-31
    1.4 实验方法  31-32
      1.4.1 原料的预处理  31
      1.4.2 样品溶液的制备  31
      1.4.3 对照品溶液的制备  31
      1.4.4 芦笋总皂苷含量测定方法  31-32
      1.4.5 芦笋总皂苷得率的计算  32
  2 结果与分析  32-36
    2.1 显色剂的筛选  32-34
      2.1.1 香草醛-冰醋酸-高氯酸法  32-33
      2.1.2 硫酸-甲醇法  33-34
      2.1.3 高氯酸法  34
      2.1.4 显色方法的确定  34
    2.2 高氯酸比色法方法学考察  34-36
      2.2.1 标准曲线的制备  34-35
      2.2.2 稳定性实验  35
      2.2.3 精密度实验  35-36
      2.2.4 重复性试验  36
      2.2.5 加样回收率实验  36
  3 讨论  36-37
第三章超声波辅助提取芦笋总皂苷的工艺研究  37-46
  1 材料与方法  37-39
    1.1 材料  37
    1.2 主要试剂  37
    1.3 主要仪器  37-38
    1.4 实验方法  38-39
      1.4.1 超声波辅助萃取方法  38
      1.4.2 单因素影响试验  38
      1.4.3 响应面分析因素水平的选取  38-39
      1.4.4 芦笋皂含量测定方法  39
  2 结果与分析  39-45
    2.1 单因素试验及其分析  39-41
      2.1.1 乙醇浓度对芦笋总皂苷得率的影响  39
      2.1.2 超声功率对芦笋总皂苷得率的影响  39-40
      2.1.3 提取温度对芦笋总皂苷得率的影响  40
      2.1.4 提取时间对芦笋总皂苷得率的影响  40-41
      2.1.5 提取次数对芦笋总皂苷得率的影响  41
    2.2 响应面法确定芦笋参总皂苷提取最佳工艺  41-45
      2.2.1 模型建立与显著性检验  41-43
      2.2.2 模型交互项的解析  43-45
      2.2.3 模型验证  45
  3 结论  45-46
第四章大孔树脂纯化芦笋总皂苷的工艺研究  46-55
  1 材料与方法  46-49
    1.1 材料  46
    1.2 主要试剂  46-47
    1.3 主要仪器  47
    1.4 实验方法  47-49
      1.4.1 芦笋粗皂苷的制备  47
      1.4.2 大孔树脂预处理  47
      1.4.3 大孔树脂的筛选  47-48
      1.4.4 S-8大孔树脂纯化芦笋皂苷工艺参数的确定  48
      1.4.5 芦笋皂苷分析方法  48-49
  2 结果与分析  49-54
    2.1 静态试验筛选大孔树脂  49-50
    2.2 动态试验确定S-8大孔树脂纯化芦笋皂苷的工艺参数  50-54
      2.2.1 上样浓度的确定  50-51
      2.2.2 吸附容量的确定  51-52
      2.2.3 洗脱剂的确定  52-53
      2.2.4 洗脱剂pH值的确定  53-54
      2.2.5 洗脱曲线的考察  54
      2.2.6 S-8最佳工艺验证  54
  3 讨论  54-55
第五章芦笋皂苷的溶血作用及其结构初探  55-63
  1 材料与方法  55-58
    1.1 材料  55
    1.2 主要试剂  55-56
    1.3 主要仪器  56
    1.4 实验方法  56-58
      1.4.1 芦笋皂苷溶血作用研究  56-57
      1.4.2 芦笋皂苷的结构初探  57-58
  2 结果与分析  58-62
    2.1 芦笋皂苷溶血作用分析  58-60
      2.1.1 体外溶血试验肉眼观察  58
      2.1.2 血红素最大吸收波长  58-59
      2.1.3 体外溶血的吸光度比较  59-60
      2.1.4 芦笋皂苷溶血作用曲线  60
    2.2 芦笋皂苷结构分析  60-62
      2.2.1 芦笋皂苷的化学定性实验分析  60-61
      2.2.2 红外光谱图谱分析  61-62
  3 讨论  62-63
第六章结论  63-65
  1 本论文主要结论  63-64
  2 展望  64-65
参考文献  65-72
致谢  72-73
附录攻读硕士期间发表的论文  73

芦笋皂苷的提取、纯化及其溶血活性研究

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