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鱼类水霉病疾病模型的构建及应用

作　者: 许佳露
导　师: 杨先乐
学　校: 上海海洋大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 水霉疾病模型草鱼抗水霉药物评价
分类号: S941
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

水霉病（Saprolegniasis），又称肤霉病（Dermatomyucosis）是一种由丝状真菌引起的水产养殖常见鱼类病害。由于分布广泛，具有很广的传播性，对寄主并没有十分严格选择性等特点，各种水生动物的从卵到各年龄成体的各个生活史一年四季的阶段都会被感染。水产养殖中水生动物一旦受伤，很容易受到水霉游动孢子的附着。水霉菌丝侵入鱼体体表后，以鱼体为寄主，获得营养以生长，致使鱼体组织发炎、坏死，并会导致鱼体负担过重，游动失常，食欲减退，很快瘦弱死亡。长期以来，水霉病的防治是鱼类病害防治中最棘手的一个难题之一。水霉病的频繁发生会给水产养殖业带来巨大的经济损失。为了更有效的防治水霉病，现在许多国家的研究者致力于这方面的研究工作，而水霉病疾病模型的建立则是水霉病防治研究中的重要一环。本文就目前动物疾病模型的国内外研究现状及近年来水霉病研究进展，对动物模型建立的原则方法，水霉病疾病模型建立的应用意义等方面进行了综述。通过感染实验中，对不同来源的水霉病致病菌进行了筛选，确立高效强致病菌株；根据水霉菌株的无性繁殖特点，优化特定菌株的产生及萌发环境因子；比较了常见水霉高感水霉鱼种的感染效果，筛选并认定合适的受感鱼种；结合组织病理学观察与临床检查，设置了感染条件；通过条件参数优化，数据可靠性分析建立了鱼类水霉病疾病的模型；利用建立的水霉疾病模型，对进行了抗水霉菌药物和商品化水霉病防治药物对模型水霉菌活性和药物敏感性及耐受性的效果进行了判断和初步筛选。研究结果如下：1、本文分离筛选了6种不同来源的水霉致病菌，分别来源于黄颡鱼鱼卵（HP）、彭泽鲫鱼卵（JL）、鲟鱼肌肉（XJ）、锦鲤表皮（QL）、草鱼鱼尾（YW）、南美白对虾卵（XL），通过感染实验发现HP为强致病菌株。镜检人工感染的卵，其表面生有明显的丝状菌丝，将菌丝进行再次分离，其形态特征与原分离菌株基本一致。因此,，初步判断菌株HP、JL、XJ、QL、YW、XL是水霉病的致病菌株。从这个实验结果还可以得到，菌株HP的感染率较其他5株菌更高，因此，可以初步选择菌株HP作为水霉病疾病模型建立的感染菌株。2、通过设置不同温度，pH，碳源与氮源营养来源等不同培养条件，根据无性繁殖特点，优化HP菌株产生及萌发环境因子：本实验结果证实菌株HP产生游动孢子的最适温度为20°C，最适pH为7；菌株HP萌发游动孢子的最适温度为25°C，最适pH为7~8；菌株HP游动孢子的萌发对营养需求不高，在蒸馏水中也能萌发；但丰富的营养条件能促进游动孢子提前萌发。3、比较草、鲫、鲢、鲤4中常见水霉高感水霉鱼种，筛选并认定草鱼为合适的受感鱼种：草鱼组能达到（93.3±4.25）%，甚至100%的人工感染率。其敏感性相当高，且F检验显示，标准偏差低，变异系数小。鲤、鲫感染率较高，分别为（73.3±5.25）%和（86.7±4.35%）%；而白鲢只能达到（46.67±15.55）%，感染率相对较低。实验结果表明草鱼相比鲢、鲤、鲫来说，具有更高的水霉菌敏感性。能作为理想的水霉病易感鱼种。4、结合组织病理学观察与临床检查，通过条件参数优化，数据可靠性分析建立了鱼类水霉病疾病的模型：通过变温、创伤和水霉浸泡感染任何一个单一条件对草鱼进行水霉病的人工感染都无法获得成功，说明任何一个单一条件都不是水霉病人工感染的充分条件或者说鱼类水霉病的产生可能是由于养殖环境多个或几个条件变化导致的结果。对利用变温、创伤和水霉浸泡三个条件进行水霉病人工感染的方法可靠性F检验，结果显示草鱼重复次数间均P>0.05且变异系数为0.34%。说明各重复次数间差异不显著，该方法具有良好的重现性，方法可靠。5、利用已建立的水霉疾病模型，本文对进行了抗水霉菌药物和商品化水霉病防治药物对模型水霉菌活性和药物敏感性及耐受性的效果进行了判断和初步筛选：不同浓度和不同种类的抗水霉菌药物和商品化水霉病防治药物均对模型化草鱼水霉病的治疗效果均表现出不同的差异性（p<0.05）。在各组药物中，随着使用药物浓度的不断升高，感染后的供试鱼种，能达到治愈效果不断加强，治愈率逐渐升高。不同种类的抗水霉菌药物对模型化草鱼水霉病的治疗效果均表现出差异性（p<0.05）：其中二硫氰基甲烷和福尔马林治愈率最高，分别能达到（37.8±17.1）%和（28.8±13.5）%；异噻唑啉酮和尼泊金乙酯治愈率较高，分别达到（30.0±15.3）%和（28.8±13.5）%；而双乙酸钠只能达到（13.3±3.3）%。其中，0.75g/mg二硫氰基甲烷和福尔马林治愈率最高，均能达到（56.7±1.6）%。不同种类的商品化水霉病防治药物对模型化草鱼水霉病的治疗效果均表现出不同：其中美婷治愈率最高，具有显著性（p<0.05），能达到（44.4±15.0）%；菌毒消和水霉灵治愈率较高，分别达到（34.4±15.3）%和（32.2±18.9）%；而水霉净II型则达到（28.9±15.0）%，但与前两种无差异显著（p＞0.05）。其中，4g/m~3美婷的治愈率最高，能达到（60.0±20.0）%。本文经过筛选不同的水霉致病菌，通过感染实验确立了HP为高效的强致病菌株；通过设置不同温度、pH、碳源、氮源为营养来源等不同培养条件，根据无性繁殖特点，优化HP菌株产生及萌发环境因子；比较草、鲫、鲢、鲤4中常见水霉高感水霉鱼种，筛选并认定草鱼为合适的受感鱼种；结合组织病理学观察与临床检查，通过条件参数优化，数据可靠性分析建立了鱼类水霉病疾病的模型；利用已建立的水霉疾病模型，本文对进行了抗水霉菌药物和商品化水霉病防治药物对模型水霉菌活性和药物敏感性及耐受性的效果进行了判断和初步筛选。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-12
引言  12
综述  12-21
  1 动物疾病模型  12-15
    1.1 动物疾病模型简介  12-14
    1.2 建立动物疾病模型的五大原则  14-15
    1.3 建立动物疾病模型的方法  15
  2 鱼类水霉病简介  15-16
  3 鱼类水霉病疾病模型建立的意义（动物模型的意义和优越性）  16-18
  4 建立鱼类水霉病疾病模型的可行性分析  18-21
    4.1 致病菌株的选择  18
    4.2 感染鱼种的选择  18-20
    4.3 感染条件的优化  20-21
第一章鱼类水霉病疾病模型强致病性菌株的筛选及其无性繁殖特性研究  21-37
  第一节鱼类水霉病感染模型致病菌株的筛选  21-27
    1. 材料与方法  21-23
      1.1 试验材料  21
      1.2 菌株的分离纯化  21-22
      1.3 强致病菌株的筛选  22
      1.4 强致病菌株的鉴定  22-23
    2. 结果与分析  23-26
      2.1 分离纯化得到的菌株  23
      2.2 强致病菌株的筛选  23-24
      2.3 强致病菌株的鉴定  24-26
    3. 讨论  26-27
  第二节鱼类水霉病疾病模型致病菌株的无性繁殖特性  27-37
    1. 材料与方法  27-30
      1.1 试验材料  27
      1.2 分离菌株孢子产生的特性测定  27-28
      1.3 分离菌株孢子萌发的特性测定  28-29
      1.4 实验数据处理方法  29-30
    2 结果与分析  30-35
      2.1 致病菌株孢子产生的各项特性  30-33
      2.2 致病菌株孢子萌发的各项特性  33-35
    3. 讨论  35-37
第二章鱼类水霉病疾病模型中受感鱼种的筛选  37-41
  1 材料与方法  38
    1.1 试验材料  38
  2. 结果与分析  38-39
  3. 小结  39-41
第三章鱼类水霉病疾病模型建立的条件参数优化  41-51
  1. 材料与方法  41-43
    1.1 试验材料  41-42
    1.2 实验分组及处理  42
    1.3 数据处理  42
    1.4 水霉病组织切片的制作  42-43
  2 结果与分析  43-47
    2.1 不同条件下鱼的感染水霉率  43-47
    2.2 草鱼感染水霉后的症状及分析  47
  3 讨论  47-51
第四章鱼类水霉病疾病模型在水霉病防治药物筛选中的应用  51-55
  1. 材料与方法  51-52
    1.1 试验材料  51
    1.2 抗水霉菌药物对模型化草鱼水霉病的治疗实验  51-52
    1.3 商品化水霉病防治药物对模型化草鱼水霉病的治疗实验  52
  2 结果与分析  52-54
    2.1 抗水霉菌药物对模型化草鱼水霉病的治疗效果  52-53
    2.2 商品化水霉病防治药物对模型化草鱼水霉病的治疗效果  53-54
  3 讨论  54-55
第五章本文的主要结论、创新点及研究展望  55-56
参考文献  56-60
发表的论文及学术会议  60-61
致谢  61

鱼类水霉病疾病模型的构建及应用

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