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松材线虫flp-32&flp-27神经肽的基因克隆与功能分析

作　者: 白会利
导　师: 唐乐尘; 谢丙炎
学　校: 福建农林大学
专　业: 植物病理学
关键词: 松材线虫 flp 基因克隆 RNA干扰 Real-time PCR
分类号: S763
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 24次
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内容摘要

本文从调节松材线虫Bursaphelenchus xylophilus行为的flp神经肽基因着手,利用NCBI的GENBANK中的EST(表达序列标签)库,下载flp基因的EST序列CJ988312和CJ991966,这两条EST序列已经具备flp编码肽的C端序列特征。25℃温箱中使用在PDA平板培养好的灰葡萄孢菌来饲养松材线虫。以松材线虫总RNA为模板,进行RT-PCR获得cDNA。克隆出CJ988312、CJ991966片段,并克隆出CJ988312基因的cDNA的3’端序列和5’端序列,拼接出648bp的全长cDNA序列。使用DNAMAN和Primerpremier5.0进行氨基酸序列推导,发现CJ988312的cDNA全长序列具备Bx-flp-32基因的特征,推测编码的氨基酸序列为AMRNSLVRFGamide。同样通过比对发现,CJ991966已经具备Bx-flp-27基因的3’端序列特征,推测编码的氨基酸序列为GGRMRFGamide。通过原位杂交和线虫神经系统的分布比对,本实验得出,Bx-flp-32基因在松材线虫雄虫的头部的围咽神经环、肛门周围的神经环、retrovesicular神经节,及腹部的神经节都有大量的表达;Bx-flp-27基因只在雌雄虫尾部表达。用浸泡法对松材线虫进行RNA干扰诱导flp基因的沉默,使用1%间苯二酚刺激线虫对dsRNA的吸收。结果显示,dsRNA本身具有毒性,可以使松材线虫出现僵持、死亡率上升、抑制基因的正常表达,但是不能影响到线虫的下一代。RNAi后,Bx-flp-27dsRNA处理的线虫,出现特异的尾部抽搐症状。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-8
1 前言  8-21
  1.1 松材线虫及其危害  8-11
  1.2 线虫神经肽FLP 的研究进展  11-20
  1.3 本论文的研究内容及意义  20-21
2 松材线虫部分flp 基因克隆  21-39
  2.1 材料和方法  21-30
  2.2 结果与分析  30-38
  2.3 小结与讨论  38-39
3 松材线虫flp 基因(Bx-flp-32& Bx-flp-27)的原位杂交  39-47
  3.1 实验材料和方法  39-42
  3.2 结果与分析  42-44
  3.3 小结与讨论  44-47
4 松材线虫flp 基因(Bx-flp-32& Bx-flp-27)功能的RNAi 分析  47-65
  4.1 实验材料和方法  47-56
  4.2 结果与分析  56-64
  4.3 小结与讨论  64-65
5 总结  65-67
参考文献  67-71
英文缩表  71-72
致谢  72

松材线虫flp-32&flp-27神经肽的基因克隆与功能分析

内容摘要

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