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一种新型聚乙烯亚胺改性材料的合成及其寡核苷酸载药系统研究

作　者: 谢晶
导　师: 滕利荣
学　校: 吉林大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 聚乙稀亚胺反义核苷酸叶酸脂质体微球
分类号: R94
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

寡核苷酸作为重要的特异性调控基因表达物质，已广泛的应用于药物开发治疗以及相关基因功能研究。但是，寡核苷酸易被核酸酶降解，具有较高的负电荷等缺点，使其直接作为治疗药物稳定性差，跨越细胞膜能力弱，治疗效果不好，为了解决以上问题我们采用聚乙烯亚胺800（PEI800）为原料，通过氮-酰化作用结合亚油酰氯化物，对PEI进行疏水性修饰，得到聚乙稀亚胺-亚油酰聚合物（PEI-LC）载药系统，PEI-LC不仅克服了低分子量PEI低转染率的缺点，而且保持了低分子量PEI低细胞毒性的优点。另外，我们采用PEI-LC作为材料制备了一种在体内更加稳定，具有生物靶向性的制剂--叶酸受体靶向脂质体，该脂质体能特异性的靶向寡核苷酸到达叶酸受体高表达的肿瘤细胞，成功转染后发挥抗肿瘤活性。最后，我们采用多重乳化/溶剂挥发法以PEI-LC作为材料制备寡核苷酸（AS‐ODN）复合物微球，并对其物理性质，形态学，释放性质等方面进行了初步研究，为以后进一步研制具有稳定控释作用的AS‐ODN复合物微球打下基础。以上研究从不同层面解决AS‐ODN在体外传递中遇到的问题，实现对目标基因的高效干扰，为恶性肿瘤及其他疾病的有效治疗开启新的途径。

全文目录

内容提要  4-5
中文摘要  5-9
Abstract  9-20
第1章前言  20-50
  1.1 本章引言  20-21
  1.2 反义寡核苷酸  21-22
    1.2.1 反义寡核苷酸（ASO）作用机理  21-22
  1.3 LOR-2501 寡核苷酸简介  22-24
  1.4 反义核苷酸和 siRNA 作为治疗药物所遇到的生物屏障  24-32
    1.4.1 简介  24
    1.4.2 核酸酶的稳定性  24-25
    1.4.3 药代动力学和生物分布  25-27
    1.4.4 经由肝脏和肾脏网状内皮系统的清除作用  27-29
    1.4.5 内皮的障碍  29-31
    1.4.6 细胞的摄取和亚细胞的分布  31-32
    1.4.7 结论  32
  1.5 基因治疗的合成聚合物载体  32-39
    1.5.1 简介  33-35
    1.5.2 基因传递聚合物特征  35-36
    1.5.3 以聚乙烯亚胺为基础的聚合物载体  36-39
  1.6 叶酸受体靶向治疗的临床转化  39-46
    1.6.1 简介  39
    1.6.2 作为细胞标志的叶酸受体  39-40
    1.6.3 根据 FR-α受体特异性抗体的免疫疗法  40-42
    1.6.4 用作叶酸靶向治疗的叶酸轭合物  42-43
    1.6.5 叶酸受体靶向显影和免疫治疗制剂  43-44
    1.6.6 叶酸受体靶向化疗试剂  44-46
    1.6.7 叶酸受体靶向免疫治疗-FolateImmune  46
    1.6.8 结论及未来展望  46
  1.7 立体依据及研究思路  46-50
第2章聚乙稀亚胺-亚油酰聚合物(PEI-LC)的合成及载药系统的建立  50-66
  2.1 材料与仪器  50-52
    2.1.1 材料  50-51
    2.1.2 仪器  51-52
  2.2 实验方法  52-56
    2.2.1 聚乙稀亚胺-亚油酰聚合物(PEI-LC)的合成  52
    2.2.2 PEI-LC 载药系统的建立  52
    2.2.3 PEI-LC 载药系统性质分析  52-54
    2.2.4 制备工艺对 PEI-LC 载药系统的影响  54-56
    2.2.5 PEI-LC 载药系统稳定性考察  56
    2.2.6 统计分析  56
  2.3 实验结果  56-62
    2.3.1 聚乙稀亚胺-亚油酰共聚物(PEI-LC)的合成  56-57
    2.3.2 制备工艺对 PEI-LC 载药系统的影响结果  57-60
    2.3.3 PEI-LC 载药系统稳定性考察结果  60-62
  2.4 讨论  62-66
第3章 AS-ODN传递系统的建立  66-90
  3.1 材料与仪器  66-68
    3.1.1 材料  66-67
    3.1.2 仪器  67-68
  3.2 实验方法  68-78
    3.2.1 PEI-LC/ASO 复合物传递系统的合成  68
    3.2.2 PEI-LC/ASO 复合物传递系统的性质分析  68-70
    3.2.3 PEI-LC/ASO 复合物体外细胞实验  70-78
  3.3 实验结果  78-86
    3.3.1 PEI-LC/ASO 复合物传递系统的性质分析  78-81
    3.3.2 PEI-LC/ASO 复合物体外细胞实验  81-86
  3.4 讨论  86-90
第4章叶酸靶向脂质体的构建及评价  90-114
  4.1 材料与仪器  90-91
    4.1.1 材料  90-91
    4.1.2 仪器  91
  4.2 实验方法  91-96
    4.2.1 L-ASO 脂质体制备工艺  91-93
    4.2.2 叶酸受体靶向脂质体的性质分析  93-94
      4.2.2.1 细胞培养  93
      4.2.2.2 脂质体粒径及 Zeta 电位分析  93-94
      4.2.2.3 叶酸脂质体短期稳定性研究  94
      4.2.2.4 叶酸脂质体长期稳定性研究  94
    4.2.3 反义寡核酸脂质体体外细胞实验  94-96
  4.3 实验结果  96-109
    4.3.1 脂质体粒径及电位分析  96
    4.3.2 叶酸脂质体短期稳定性  96-98
    4.3.3 叶酸脂质体长期稳定性  98-99
    4.3.4 毒性试验  99-100
    4.3.5 流式细胞仪检测细胞吸收情况  100-101
    4.3.6 流式细胞仪检测脂质体的稳定性情况  101-102
    4.3.7 激光共聚焦显微镜  102-107
    4.3.8 RT-PCR 定量测定 mRNA  107-109
  4.4 讨论  109-114
第5章 AS-ODN复合物控释传递系统的建立  114-122
  5.1 材料及器材  114-115
    5.1.1 材料  114-115
    5.1.2 仪器设备  115
  5.2 实验方法  115-117
    5.2.1 AS-ODN 复合物微球的制备工艺  115
    5.2.2 AS-ODN 复合物微球的表征  115-117
  5.3 实验结果  117-119
    5.3.1 不同 AS-ODN/PEI-LC 浓度对 ASO 微球粒径及载药量的影响  117
    5.3.2 不同的 AS-ODN/PEI-LC 浓度对 ASO 微球形态影响  117-119
    5.3.3 不同 AS-ODN 复合物加入量对微球释放性质的影响  119
  5.4 结论和讨论  119-122
参考文献  122-140
攻读博士期间取得的科研成果  140-141
致谢  141

一种新型聚乙烯亚胺改性材料的合成及其寡核苷酸载药系统研究

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