学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

菜粉蝶提取物诱导黄瓜对炭疽病的抗性及其机理研究

作　者: 田菲菲
导　师: 朱杰华；蒋继志
学　校: 河北农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 黄瓜炭疽病诱导抗病性技术体系生化机制 DDRT-PCR
分类号: S436.421
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
下　载: 219次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本试验测定了37种植物和4种昆虫的80％乙醇提取物诱导黄瓜对炭疽病的抗病效果，在此基础上构建了菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病的技术体系，探讨了菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病的生理生化机制，并利用DDRT-PCR技术对经菜粉蝶提取物诱导处理后接种炭疽病菌黄瓜叶片的基因表达进行了分析，对可能与诱导黄瓜抗炭疽病相关的差异表达基因片段进行回收、克隆和测序，为最终克隆这些基因、研究其功能奠定基础。主要结果如下：1．发现了菜粉蝶提取物可诱导黄瓜对黄瓜炭疽病产生局部抗性和系统抗性。2．建立了适合菜粉蝶提取物免疫诱导黄瓜抗炭疽病的技术体系。①最佳诱导方法为叶面喷雾法。②菜粉蝶提取物的最佳有效处理浓度为5.0 mg／mL。③诱导抗性表达的最佳诱导间隔期为3d。④有效诱导次数为1次。⑤最佳诱导处理时期为黄瓜幼苗二叶一心期。3．黄瓜叶片经菜粉蝶提取物诱导后各种防御酶活性较空白对照均有所升高，过氧化物酶活性于诱导后第5天达高峰值38.9(ΔOD／g·min)，多酚氧化酶活性于诱导后第4天达高峰值28.3(0.001ΔOD／g·s)，苯丙氨酸解氨酶活性于诱导后第3天达高峰值56.4(0.01ΔOD／g·min)，超氧化物歧化酶活性于诱导后第2天达高峰值50.3(抑制率/g)。4．菜粉蝶提取物诱导处理对黄瓜叶片的脯氨酸、丙二醛含量变化没有明显影响。5．菜粉蝶提取物诱导处理可直接诱导黄瓜处理叶片或系统叶片积累病程相关蛋白(PRs)，如再用炭疽病菌挑战接种，PRs在黄瓜植株中的积累会更加明显。6．用3个锚定引物、26个随机引物的引物组合对经菜粉蝶提取物诱导处理后接种炭疽病菌和只接种炭疽病菌的黄瓜叶片进行DDRT-PCR扩增，经聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测。共获得67条差异表达基因片段，对其进行回收，回收成功率为89.6％。挑选其中5个差异片段进行克隆、测序，并进行同源性分析，结果表明D1片段序列(344bp)与来自叶绿体psbB基因编码的47kD蛋白结合叶绿素a构成的蛋白复合物photosystemⅡCP47同源性高达95％，其余片段与已登记的基因无同源性。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-11
引言  11-24
  1 植物诱导抗病性的特点  11-12
    1.1 非特异性  11
    1.2 滞后性  11-12
    1.3 不完全性  12
    1.4 耗能性  12
    1.5 诱导物种类繁杂  12
    1.6 可控性  12
    1.7 持续性  12
  2 植物病害诱抗剂的研究概况  12-14
    2.1 生物诱抗剂  13-14
    2.2 非生物诱抗剂  14
  3 影响植物诱导抗病性的因素  14-16
  4 植物诱导抗病性的机制  16-22
    4.1 物理机制  16-17
    4.2 生理生化机制  17-21
    4.3 分子机制  21-22
  5 本研究的目的意义  22-23
  6 研究展望  23-24
第一章诱抗剂的筛选  24-34
  1 材料与方法  24-28
    1.1 试验材料  24-25
    1.2 试验方法  25-28
  2 结果与分析  28-31
    2.1 不同提取物诱导黄瓜离体叶片抗炭疽病的效果  28-30
    2.2 3种提取物对黄瓜炭疽病菌菌丝生长的抑制作用  30
    2.3 3种提取物对黄瓜炭疽病菌分生孢子萌发的抑制作用  30
    2.4 3种提取物对黄瓜炭疽病菌附着胞形成的抑制作用  30-31
    2.5 菜粉蝶提取物对黄瓜植株抗炭疽病的诱导作用  31
  3 本章讨论  31-34
    3.1 关于诱抗剂与诱导抗病性的几点探讨  31-32
    3.2 关于后续工作  32-34
第二章菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病技术体系的构建  34-41
  1 材料与方法  34-36
    1.1 试验材料  34
    1.2 黄瓜炭疽病菌孢子悬浮液的制备  34
    1.3 诱导方法及部位的测试  34-35
    1.4 诱导浓度的测试  35
    1.5 诱导间隔期的测试  35-36
    1.6 诱导次数的测试  36
    1.7 诱导处理时期的测试  36
  2 结果与分析  36-39
    2.1 不同诱导方法及部位对菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病的影响  36-37
    2.2 不同诱导浓度对菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病的影响  37
    2.3 不同诱导间隔期对菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病的影响  37-38
    2.4 不同诱导次数对菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病的影响  38
    2.5 不同诱导时期对菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病的影响  38-39
  3 本章讨论  39-41
第三章菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病的生理生化机理  41-71
  1 材料与方法  41-50
    1.1 试验材料  41
    1.2 菜粉蝶提取物的制备  41
    1.3 诱导处理及挑战接种  41
    1.4 样本的采集  41
    1.5 过氧化物酶(POD)的提取与测定  41-42
    1.6 多酚氧化酶(PPO)的提取与测定  42
    1.7 苯丙氨酸解氨酶(PAL)的提取与测定  42-43
    1.8 超氧化物歧化酶(SOD)的提取与测定  43
    1.9 POD同工酶电泳  43-45
    1.10 脯氨酸的提取与测定  45
    1.11 丙二醛(MDA)的提取与测定  45-46
    1.12 β-1,3-葡聚糖酶的提取及测定  46
    1.13 几丁质酶的提取及测定  46-48
    1.14 细胞间隙液(TWF)的提取  48
    1.15 蛋白质的含量测定  48
    1.16 SDS-PAGE电泳  48-50
  2 结果与分析  50-67
    2.1 菜粉蝶提取物诱导及挑战接种对黄瓜叶片防御酶活性的影响  50-55
    2.2 菜粉蝶提取物诱导及挑战接种对黄瓜叶片非酶类物质含量的影响  55-58
    2.3 菜粉蝶提取物诱导及挑战接种对黄瓜叶片病程相关蛋白的影响  58-67
  3 本章讨论  67-71
    3.1 关于酶的变化与抗病性的关系  67-68
    3.2 关于同工酶的变化与抗病性的关系  68
    3.3 关于非酶类物质的含量变化与抗病性的关系  68-69
    3.4 关于病程相关蛋白(PRs)产生的探讨  69
    3.5 关于病程相关蛋白与植物抗病性的探讨  69
    3.6 关于后续工作  69-71
第四章菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病的基因表达差异  71-92
  1 材料与方法  71-80
    1.1 试验材料  71-73
    1.2 试验方法  73-80
  2 结果与分析  80-90
    2.1 黄瓜叶片RNA的提取和第一链cDNA的合成  80
    2.2 DDRT-PCR扩增  80-82
    2.3 差异条带的选择  82-84
    2.4 差异条带的回收及二次扩增  84
    2.5 回收差异条带的纯化  84-85
    2.6 阳性cDNA片段的转化  85-86
    2.7 插入片段的检测  86-87
    2.8 克隆片段测序  87-90
    2.9 同源性分析  90
  3 本章讨论  90-92
    3.1 关于试验材料的选择  90
    3.2 关于D1片段的几点探讨  90-91
    3.3 关于后续工作  91-92
全文结论  92-93
参考文献  93-101
在读期间发表的学术论文  101-102
作者简历  102-103
致谢  103-104
附录  104-109

菜粉蝶提取物诱导黄瓜对炭疽病的抗性及其机理研究

内容摘要

全文目录

相似论文