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人胚胎生殖细胞体外培养体系的建立及其向心肌前体细胞分化的初步研究

作　者: 王英
导　师: 李玉林
学　校: 吉林大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源成纤维样细胞人胚胎生殖细胞细胞培养鉴定心肌前体细胞 5-氮杂胞苷分化人胚胎心肌细胞
分类号: R329
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

为优化人胚胎生殖细胞(hEG)的体外培养体系及研究5-氮杂胞苷对hEG向心肌前体细胞分化的影响,我们分离培养了人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中原始生殖细胞(PGCs)周围的成纤维样细胞,证实其具有稳定的生物学特性,并首次证实其表达体外培养hEG所必需的细胞因子。以此人胚胎成纤维样细胞作为饲养层细胞,模拟PGCs在早期胚胎发育过程中不断迁移、扩增并保持未分化状态时的体内环境,同时添加bFGF、LIF和forskolin细胞因子,体外成功培养hEG,并对其生物学特性进行鉴定。所培养的hEG可传8～10代,并能够自我更新,保持未分化状态、正常人类二倍体核型及多向分化能力,建立了一种新的hEG体外培养方法。为hEG的进一步研究及其临床应用奠定了基础。在此基础上,进一步利用半定量逆转录多聚酶链反应检测5-氮杂胞苷对hEG向心肌前体细胞分化的影响。初步研究表明,5-氮杂胞苷可能具有促进hEG向心肌前体细胞分化的能力。同时,我们亦自人早期胚胎中分离培养人胚胎心肌细胞,并对其生物学特性进行初步研究。为今后心血管疾病的干细胞移植治疗研究奠定了基础。

全文目录

提要  5-9
前言  9-11
第一篇文献综述  11-34
  第一章胚胎生殖细胞  11-28
    一. 胚胎生殖细胞的分离与培养  11-17
    二. 胚胎生殖细胞的生物学特性  17-19
    三. 胚胎生殖细胞的诱导分化  19-23
    四. 胚胎生殖细胞的应用前景  23-25
    五. 胚胎生殖细胞研究面临的问题  25-28
  第二章心血管疾病的细胞治疗  28-34
    一. 胚胎干细胞  29
    二. 间充质干细胞  29-30
    三. 胚胎心肌细胞  30-31
    四. 心肌特异性干细胞  31-32
    五. 成骨骼肌细胞  32
    六. 成纤维细胞  32-34
第二篇实验内容  34-74
  第一章人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源成纤维样细胞的分离. 培养及鉴定  34-47
    一. 实验材料  34-35
    二. 实验方法  35-39
    三. 实验结果  39-46
    四. 小结  46-47
  第二章人胚胎生殖细胞的分离. 培养及鉴定  47-61
    一. 实验材料  47-48
    二. 实验方法  48-54
    三. 实验结果  54-60
    四. 小结  60-61
  第三章人胚胎心肌细胞的分离培养及人胚胎生殖细胞向心肌前体细胞的分化  61-74
    一. 实验材料  61-62
    二. 实验方法  62-65
    三. 实验结果  65-73
    四. 小结  73-74
讨论  74-82
结论  82-83
本论文创新点  83-84
参考文献  84-96
攻读博士学位期间发表论文  96-97
中文摘要  97-103
Abstract  103-111
致谢  111

人胚胎生殖细胞体外培养体系的建立及其向心肌前体细胞分化的初步研究

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