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（+）一叶萩碱对学习记忆的改善作用以及对突触可塑性的影响及其机制

作　者: 许琳
导　师: 张均田
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 药理学
关键词: 突触传递改善作用学习记忆障碍学习记忆能力海马齿状回神经元细胞内钙受体拮抗剂依赖性海马组织
分类号: R96
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

随着人们生活水平的提高和医疗条件的改善，世界许多国家人均寿命延长，因而老龄人群的比例也逐渐提高。据美国一家机构最近的调查显示，美国大约有一半以上老人深受记忆衰退的困扰。在我国，65岁以上老人现已达到9610万，记忆衰退同样困扰我国的老龄人群，而且记忆障碍也存在于不同年龄的人群中，即使一、二十岁至五十多岁的青壮年人群中，也存在有记忆障碍的发生。这不但严重影响了人们的生活质量，也随之带来了一系列的社会问题。因此，寻找和开发出治愈此类疾病的药物就成了刻不容缓的任务。一叶萩碱（securinine）是从大戟科植物一叶萩叶子中分离出的一种生物碱。天然产一叶萩碱有左旋（-）和右旋（+）之分，先前我们在细胞保护作用、体外胆碱酯酶活性测定和电生理突触可塑性研究中发现，右旋一叶萩碱的药效优于或等于左旋。同时在对（-）、（+）一叶萩碱的急性毒性研究中发现，右旋（+）毒性明显小于左旋（-），约差4倍左右。综合考虑，我们着重对（+）一叶萩碱进行了研究。本工作采用细胞培养和电生理技术，运用行为学、组化、生化和分子生物学方法从细胞到分子、体外到体内，研究了（+）一叶萩碱对学习记忆障碍的改善作用以及对突触可塑性的影响。一、（+）一叶萩碱对Aβ、GABA引起的PC12细胞和原代皮层神经细胞损伤的保护作用 1、MTT法测定（+）一叶萩碱对Aβ引起的PC12细胞损伤的保护作用凝聚态Aβ（25-35）有明显的细胞毒性。将老化96小时的Aβ（25-35）与PC12细胞孵育48小时后，细胞MTT还原能力降低，约为正常细胞的80％，（+）一叶萩碱可以改善Aβ（25-35）引起的细胞毒性，且这种改善作用呈剂量依赖性，其中10^-7mol／l（+）一叶萩碱的改善作用显著。 2、（+）一叶萩碱对GABA引起的原代皮层神经细胞损伤的保护作用1mM GABA可以明显增强KA（0.2mM）引起的细胞急性毒性，导致皮层神

全文目录

缩略词  6-8
中文摘要  8-13
英文摘要  13-18
第一部分：(+)一叶萩碱对Aβ、GABA引起的PC12细胞和原代皮层神经细胞损伤的保护作用  18-28
  1.前言  18-19
  2.材料方法  19-20
    2.1 MTT法测定(+)一叶萩碱对Aβ(25-35)引起的PC12细胞损伤的保护作用  19-20
    2.2 乳酸脱氢酶活力法测定(+)一叶萩碱对GABA引起的原代皮层神经细胞损伤的保护作用  20
  3.结果  20-24
  4.讨论  24-26
  5.小结  26-27
  6.参考文献  27-28
第二部分：(+)一叶萩碱对大鼠海马齿状回突触传递活动的影响  28-42
  (一)、(+)一叶萩碱对麻醉大鼠海马齿状回突触传递效能的作用  28-36
    1.前言  28
    1.2 材料与方法  28-30
    1.3 结果  30-33
      一叶萩碱对麻醉大鼠基础突触传递效能的影响  30-31
      一叶萩碱对麻醉大鼠高频刺激诱导的LTP的作用  31-33
    1.4 讨论  33-34
    1.5 小结  34-35
    1.6 参考文献  35-36
  (二)、(+)一叶萩碱对自由活动大鼠海马齿状回突触传递效能的影响  36-42
    2.1 前言  36
    2.2 材料与方法  36-37
    2.3 结果  37-39
    2.4 讨论  39-40
    2.5 小结  40-41
    2.6 参考文献  41-42
第三部分、(+)一叶萩碱对GABA、东莨菪碱以及Aβ(25-35)引起的学习记忆障碍的改善作用  42-51
  1.前言  42
  2.材料方法  42-45
    2.1 (+)一叶萩碱对东莨菪碱引起的学习记忆障碍的改善作用  43
    2.2.(+)一叶萩碱对GABA引起的学习记忆障碍的改善作用  43
    2.3.(+)一叶萩碱对Aβ(25-35)所致大鼠学习记忆障碍的改善作用  43-45
  3.结果  45-48
  4.讨论  48-49
  5.小结  49-50
  6.参考文献  50-51
第四部分、(+)一叶萩碱改善学习记忆障碍、增强突触传递功能的机制  51-117
  (一)、(+)一叶萩碱改善Aβ(25-35)所致大鼠学习记忆障碍的机制研究  51-65
    1.前言  51
    2.材料方法  51-55
      2.1 生化法测定(+)一叶萩碱对大鼠皮层及海马组织AchE和ChAT活性的影响  52-53
      2.2 免疫组化法检测(+)一叶萩碱对大鼠皮层及海马组织AchE和GFAP蛋白的表达  53-55
    3.结果  55-60
    4.讨论  60-62
    5.小结  62-63
    6.参考文献  63-65
  (二)、(+)一叶萩碱增强突触传递功能的机制  65-117
    2.1、GABA和兴奋性氨基酸受体对(+)一叶萩碱诱导的LTP的影响  65-80
      2.1.1 前言  65
      2.1.2 材料与方法  65-67
      2.1.3 结果  67-73
        GABA对(+)一叶萩碱诱导的LTP的影响  67-68
        AMPA受体在(+)一叶萩碱诱导麻醉大鼠DG LTP中的作用  68-69
        AP5对基础突触传递及HFS诱导的LTP的影响  69-70
        Nimodipine对基础突触传递及HFS诱导的LTP的影响  70
        AP5／Nimodipine对(+)一叶萩碱诱导的LTP的影响  70-72
        APV／Nimodipine对(+)一叶萩碱诱导的[Ca~(2+)]_i升高的影响  72-73
      2.1.4 讨论  73-77
      2.1.5 小结  77-78
      2.1.6 参考文献  78-80
    2.2、激光共聚焦测定(+)一叶萩碱对PC12细胞胞内钙的影响  80-92
      2.2.1 前言  80
      2.2.2 材料与方法  80-81
        PC12细胞的培养  80-81
        胞浆游离钙的测定  81
      2.2.3 结果  81-87
      2.2.4 讨论  87-89
      2.2.5 小结  89-90
      2.2.6 参考文献  90-92
    2.3、Naloxone对(+)一叶萩碱诱导麻醉大鼠DG LTP的影响  92-98
      2.3.1 前言  92
      2.3.2 材料与方法  92
      2.3.3 结果  92-94
      2.3.4 讨论  94-95
      2.3.5 小结  95-96
      2.3.6 参考文献  96-98
    2.4、NO对(+)一叶萩碱诱导麻醉大鼠DG LTP的影响  98-107
      2.4.1 前言  98
      2.4.2 材料与方法  98-99
        选择性NOS抑制剂对(+)一叶萩碱诱导的LTP的作用  98-99
        记录PS后测定脑中NO含量  99
      2.4.3 结果  99-103
      2.4.4 讨论  103-105
      2.4.5 小结  105-106
      2.4.6 参考文献  106-107
    2.5、(+)一叶萩碱诱导的LTP中信号传导途径的参与  107-117
      2.5.1 前言  107
      2.5.2 材料与方法  107-111
      2.5.3 结果  111-113
        给予一叶萩碱或HFS诱导LTP后测定海马中CREB及p-CREB的表达  111
        给予一叶萩碱或HFS诱导LTP后测定海马中ERK及p-ERK的表达  111-112
        PKA拮抗剂(Rp-cAMP)对p-CREB、p-ERK表达的影响  112-113
      2.5.4 讨论  113-115
      2.5.5 小结  115-116
      2.5.6 参考文献  116-117
综合讨论  117-122
结语  122-123
参考文献  123-125
致谢  125-126
个人简历  126-127
原创性及知识产权声明  127

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