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垂体特异转录因子Pit-1蛋白调节垂体生长激素基因表达的作用及其在生长激素缺乏症发病中的意义

作　者: 王秩
导　师: 邓洁英；史轶蘩
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 内分泌学
关键词: 荧光素酶活性生长激素缺乏症博士学位论文垂体前叶基因突变医科大学细胞因子基因表达共转染转录因子
分类号: R584
类　型: 博士论文
年　份: 1999年
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内容摘要

垂体特异的转录因子Pit-1蛋白系调节垂体前叶胚胎发育及生长激素（GH）、催乳素（PRL）和促甲状腺素（TSH）基因表达的重要因子。垂体GH的分泌及合成受下丘脑的严格控制，生长激素释放素（GHRH）调节垂体GH基因表达受核内转录因子Pit-1蛋白的调节。最近的研究表明细胞因子及其受体广泛存在于中枢神经系统（CNS），特别是下丘脑和垂体中。在整体水平和细胞水平上均观察到细胞因子对GH分泌的影响，但细胞因子是否对垂体GH基因的表达有调节作用及其与Pit-1蛋白的关系尚未见报道。本研究的目的是在基因水平上研究人GHRH及白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）对垂体GH基因表达的调控作用，以及Pit-1蛋白在其中所起的作用；同时筛查生长激素缺乏症（GHD）患者是否存在pit-1基因突变，以了解pit-1基因突变在GHD发病中的意义。首先以人GH启动子和荧光素酶报告基因构建的表达质粒（pGL₂-GH-Luc）单独转染或与pit-1 cDNA表达质粒（PcDNA-pit-1cDNA）共转染于大鼠垂体GH₃细胞中，观察加入人GHRH、IL-1β、IL-6和TNF-α后GH₃细胞中荧光素酶的表达；并于共转染的同时加入pit-1基因反义寡聚核苷酸（pit-1 OND）抑制Pit-1蛋白的翻译过程，进一步观察GH₃细胞中荧光素酶表达的变化。为了检测GHD患者pit-1基因突变，采用单链构象多态性（SSCP）和双脱氧指纹法（ddF）筛查pit-1基因突变，用直接测序法最后确定筛选结果是否准确。我们观察到：在单独转染pGL₂-GH-Luc质粒的大鼠垂体GH₃细胞培养液中，加入人GHRH(10^-9～10^-7M)并不影响GH₃细胞中的荧光素酶表达。pGL₂-GH-Luc与PcDNA-pit-1cDNA质粒共转染GH₃细胞时，人GHRH(10^-8及10^-7M)则能明显增加GH₃细胞中荧光素酶的表达（p均＜0.01），最高可达对照组

全文目录

英文缩略语  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
第一部分 GHRH及细胞因子对垂体GH基因表达的调节作用及其与Pit-1蛋白的关系  11-47
  前言  11-13
  材料与方法  13-21
    实验材料  13-15
    实验方法  15-21
  结果  21-38
  讨论  38-42
  小结  42-43
  结论  43-44
  第一部分参考文献  44-47
第二部分 pit-1基因突变检测方法的建立-SSCP和ddF在基因突变筛选中准确性的比较  47-64
  前言  47-48
  材料与方法  48-56
    实验标本  48
    SSCP检测基因突变  48-52
    ddF检测基因突变  52-55
    直接测序  55-56
  结果  56-60
  讨论  60-62
  小结  62-63
  结论  63-64
第三部分 pit-1基因突变在生长激素缺乏症发病中的意义  64-80
  前言  64-65
  材料与方法  65-71
    研究对象  65-66
    生长激素缺乏症患者pit-1基因突变检测  66-71
  结果  71-73
  讨论  73-76
  小结  76
  结论  76-77
  第二、三部分参考文献  77-80
论文综述  80-104
  1．细胞因子对垂体生长激素分泌的调节  80-91
  2．pit-1基因突变与生长激素缺乏症  91-104
致谢  104

垂体特异转录因子Pit-1蛋白调节垂体生长激素基因表达的作用及其在生长激素缺乏症发病中的意义

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