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人脑发育和分化相关基因cDNA的分离与克隆

作　者: 潘美辉
导　师: 强伯勤；袁建刚
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 脑发育与分化基因差异表达表达序列标签(EST) cDNA
分类号: Q78
类　型: 博士论文
年　份: 1997年
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内容摘要

从胚胎发育到个体生长、成熟、衰老的整个生命过程中，人脑始终发挥十分重要的作用。脑的发育与分化直接影响它的各种功能，因此成为生物医学最活跃的研究领域之一。脑的发育实质上是基因按照严格的时间顺序和空间关系有序表达的复杂过程。虽然含同源异型盒的基因家族等一系列基因在胚胎脑组织的表达特征及有关功能已被阐明，迄今为止，大量与人脑发育、分化相关的基因尚属未知。系统地分离、克隆与脑的发育、分化相关基因的cDNA可为鉴定基因功能、探索脑发育的奥秘及防治脑发育不良导致的神经疾患提供有益的信息，具有重要的意义。本文选择不同部位(如大脑与小脑)或不同发育阶段(13周、33周)的人胎脑组织，应用mRNA差异显示分析(又称DDRT-PCR)等技术，系统分离、鉴定有差异表达特征的新基因cDNA。利用锚定引物和任意引物之间的搭配，总共进行了54套不同引物的DDRT-PCR反应，发现了150余种有差异表达特征的PCR产物(即cDNA)，其大小介于100-500bp。精选85种差异显示谱比较典型的PCR产物并进一步纯化，用于克隆、测序。总共获得90个不同的cDNA序列，输送到GenBank的dbEST分部，均作为新的EST而获得序列编号。根据mRNA差异显示谱，10个EST仅在13周的胎脑组织表达，19个EST仅在33周的胎脑组织表达，11个EST仅在13周、33周大脑组织表达，21个EST表达于13周、33周的小脑，其余29个EST在不同组织及发育阶段的表达有交叉现象。应用Blast软件，将90个人胎脑表达的EST与GenBank的非重复序列等数据库作类似性比较，发现74个EST不与任何已知基因序列同

全文目录

英、汉名词对照  4-5
中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
前言  11-14
材料与方法  14-36
实验结果  36-79
讨论  79-84
小结  84-86
参考文献  86-91
附录一  91-103
综述  103-121
  参考文献  119-121
附录二  121-122
致谢  122

人脑发育和分化相关基因cDNA的分离与克隆

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