学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）基因在链霉菌及大肠杆菌中的克隆表达研究

作　者: 王朝健
导　师: 李元
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 链霉菌大肠杆菌免疫抑制剂启动子重组菌分泌表达细胞表面受体淋巴细胞克隆表达分子量
分类号: R346
类　型: 博士论文
年　份: 2001年
下　载: 47次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

CTLA-4(cytotoxic T lymphocyte-associated protein or antige-4，毒性T淋巴细胞相关蛋白-4)是免疫球蛋白超家族成员之一。主要存在于激活的T细胞表面，多以二聚体形式存在，部分以单体形式存在。CTLA-4二聚体与B7具有高亲和力的受体—配基结合活性，结合力较CD28大150倍，是T细胞激活双信号模型中与CD28／B7共同发挥作用的重要的共刺激信号之一，目前被认为是一种天然免疫下调物质。在多种小鼠模型中已经证明阻断CD28／B7分子的共刺激信号，可抑制体液免疫、移植排斥、缓解自身免疫性疾病、阻断多种免疫反应。研究显示CTLA-4胞外片段与转染B7分子的CHO细胞能特异性结合、体外实验表明能与细胞表面B7形成免疫共沉淀、CTLA-4Ig对动物器官移植具有免疫抑制效应，上述结果为该片段用于临床治疗提供了有力证据。我们通过PCR扩增获得CTLA-4cDNA片段。以含CTLA-4基因的质粒pE为模板，分别设计了能与链霉菌表达质粒及大肠杆菌表达质粒相匹配的引物，采用PCR方法扩增得到相应的CTLA-4片段，序列分析证明结果正确。在链霉菌中进行了CTLA-4克隆表达研究。本工作应用两种不同信号肽—vsi和gPP对链霉菌的分泌表达进行研究。在vsi信号肽研究中我们构建了两种不同长度的vsi信号肽序列—10bp和230bp与扩增片段的融合，融合片段经列测定证实其阅读框架正确后，克隆入链霉菌—大肠杆菌穿梭质粒pUWL-219，转化S．lividansTK24。重组菌分别命名为S．lividans[pUWL219-46]和S．lividans[pUWL219-VC]。同时将CTLA-4片段克隆至新型链霉菌—大肠杆菌穿梭质粒载体pLNSP的gPP信号肽下游。重组菌命名为S．lividans[pLNSP／CTLA-4]. 为考察vsi信号肽及gPP信号肽调控序列对CTLA-4分泌表达的影响，收集不同时间重组菌的发酵上清及菌体进行胞内外分泌研究。SDS-PAGE 及 Western blotting 结果表明：重组菌S．lividans[pLNSP／CTLA-4]，和重组菌 S.lividans[pUWL219VC]均能表达

全文目录

缩略语一览表  4-6
综述一新型免疫抑制剂——CTLA-4研究进展  6-25
综述二异源蛋白基因在链霉菌中的表达研究  25-37
中文摘要  37-39
英文摘要  39-41
前言  41-44
材料与方法  44-55
结果与讨论：  55-80
  (一) CTLA-4基因在链霉菌中的克隆与表达  55-75
  (二) CTLA-4基因在大肠杆菌中的克隆与表达  75-80
结论  80-81
参考文献  81-88
致谢  88

毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）基因在链霉菌及大肠杆菌中的克隆表达研究

内容摘要

全文目录

相似论文