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巴戟天对大鼠骨髓基质细胞增殖、成骨分化及Cbfα1基因表达的影响

作　者: 王力
导　师: 王和鸣
学　校: 福建中医学院
专　业: 中医骨伤科学
关键词: 血清药理学骨髓基质细胞诱导分化成骨细胞体外培养 cbfα1 补肾强筋骨大鼠 @巴戟天
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

目的通过巴戟天水提物、醇提物对体外培养大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)增殖、诱导BMSCs的成骨分化及Cbfα1基因表达影响的研究,建立含巴戟天血清体外培养大鼠BMSCs模型,从分子生物学水平研究巴戟天补肾强筋骨的作用机制。方法采用含药血清的方法体外培养大鼠骨髓基质细胞,分A组(巴戟天水提物组)、B组(巴戟天醇提物组)、C组(对照组)、D组(经典成骨诱导剂组)、E组(巴戟天水提物+经典成骨诱导剂组)、F组(巴戟天醇提物+经典成骨诱导剂组),采用MTT法检测A组、B组、C组不同给药剂量、给药时间、采血时间、血清浓度的含药血清培养大鼠BMSCs 72小时后的OD值,建立含巴戟天水提物、醇提物血清体外培养大鼠BMSCs模型;流式细胞仪检测A组、B组、C组同一血清浓度体外培养大鼠BMSCs 72小时后的G1、S、G2期的DNA含量;采用改良Gomori钙钴法、茜素红染色、Van-Gieson苦味酸-酸性品红法分别观察各组碱性磷酸酶(ALP)、矿化结节、Ⅰ型胶原染色情况;取各组不同时间点培养液测定碱性磷酸酶比活性及骨钙素含量以及采用RT-PCR方法进行半定量分析各组不同时间点的Cbfα1基因表达;结果:模型中4天组(给药时间),等剂量组(给药剂量),1小时组(采血时间)的OD值,与对照组比较有显著性差异(P<0.05),各组培养血清浓度的OD值20%>10%>5%,巴戟天水提物、巴戟天醇提物组S期细胞DNA含量显著高于对照组,20%巴戟天醇提物血清浓度的影响最优。碱性磷酸酶染色、茜素红染色强弱顺序为F组>E组>D组>B组>A组,C组为阴性,Ⅰ型胶原染色强弱顺序为F组>E组>D组>B组>A组>C组,碱性磷酸酶比活性和骨钙素(BGP)含量测定结果为:A组、B组、D组、E组、F组在同一时间点均高于C组(P<0.05);E组、F组在同一时间点均高于D组(P<0.05)。经典成骨诱导方法诱导至第3天的时间点开始

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一部分大鼠骨髓基质细胞的分离和培养  11-17
  1．1 研究目的  11
  1．2 实验材料  11
  1．3 实验方法  11-12
  1．4 实验结果  12-14
  1．5 讨论  14-16
    1．5．1 骨髓基质细胞的特性  14
    1．5．2 骨髓基质细胞的分离培养  14-15
    1．5．3 关于骨髓基质细胞的鉴定问题  15-16
    1．5．4 骨髓基质细胞的前景展望  16
  1．6 小结  16-17
第二部分巴戟天对大鼠骨髓基质细胞增殖的影响  17-29
  2．1 研究目的  17
  2．2 含巴戟天血清对大鼠骨髓基质细胞增殖的量效与时效关系的建立  17-22
    2．2．1 实验材料  17
    2．2．2 实验方法  17-18
    2．2．3 统计方法:  18-19
    2．2．4 实验结果  19-22
      2．2．4．1 不同给药时间对BMSCs增殖的影响  19-20
      2．2．4．2 不同给药剂量对BMSCs增殖的影响  20-21
      2．2．4．3 不同采血时间对BMSCs增殖的影响  21-22
  2．3 含巴戟天水提物、醇提物血清对大鼠骨髓基质细胞增殖影响的比较  22-25
    2．3．1 实验材料  22
    2．3．2 实验方法  22-23
    2．3．3 实验结果  23-25
      2．3．3．1 倒置相差显微镜观察结果  23
      2．3．3．2 MTT法检测结果  23-24
      2．3．3．3 流式细胞仪检测结果  24-25
  2．4 讨论  25-28
    2．4．1 采用中药血清药理学方法研究的意义  25
    2．4．2 实验动物的选择  25-26
    2．4．3 巴戟天药物血清的制备  26-27
    2．4．4 关于巴戟天对骨髓基质细胞培养影响的血清药理学实验方法的建立  27
    2．4．5 MTT检测法的原理和意义  27
    2．4．6 巴戟天对骨髓基质细胞增殖影响的意义  27-28
  2．5 小结  28-29
第三部分巴戟天对大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化影响  29-41
  3．1 研究目的  29
  3．2 实验材料  29
  3．3 实验方法  29-30
  3．4 实验结果  30-35
    3．4．1 成骨细胞的鉴定结果  30-34
    3．4．2 碱性磷酸酶比活性测定结果  34-35
    3．4．3 骨钙素(BGP)含量测定结果  35
  3．5 讨论  35-40
    3．5．1 细胞进化过程中的生物学属性  35-36
    3．5．2 诱导BMSCs向成骨细胞分化的条件和物质  36-37
    3．5．3 诱导BMSCs向成骨细胞分化的机制  37-38
    3．5．4 中药对BMSCs向成骨细胞分化影响的相关研究  38
    3．5．5 巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化影响和作用机制  38-39
    3．5．6 诱导BMSCs向成骨细胞分化的意义  39-40
  3．6 小结  40-41
第四部分巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程Cbfα1表达的影响  41-48
  4．1 研究目的  41
  4．2 实验材料  41
  4．3 实验方法  41-42
  4．4 实验结果  42-44
    4．4．1 经典成骨诱导方法培养Cbfα1 mRNA的相对表达量结果  42-43
    4．4．2 培养至第12天时各组Cbfα1 mRNA的的相对表达量的结果  43
    4．4．3 RT-PCR产物电泳结果  43-44
  4．5 讨论  44-47
    4．5．1 Cbfα1基因的结构特征  44
    4．5．2 Cbfα1基因与成骨细胞分化  44
    4．5．3 Cbfα1基因表达的调控机制  44-45
    4．5．4 检测Cbfα1基因的意义及应用前景  45-46
    4．5．5 相关中药对Cbfα1基因表达的影响的研究进展  46
    4．5．6 巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程Cbfα1表达的影响  46-47
  4．6 小结  47-48
结论  48-49
特色与创新  49-50
参考文献  50-55
致谢  55-56
附录  56-89
  附录1 综述  56-66
  附录2 在校期间发表的文章目录  66-67
  附录3 在校期间发表的文章  67-89
  附录4 个人简历  89

巴戟天对大鼠骨髓基质细胞增殖、成骨分化及Cbfα1基因表达的影响

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