学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

固定化酶活性的表面微区分析与研究

作　者: 丁良
导　师: 姚子华
学　校: 河北大学
专　业: 分析化学
关键词: 悬浮聚合 固定化酶 X射线微区分析 定位 酶活
分类号: O658.9
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
下　载: 589次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


酶的固定化及酶促反应是最具发展前景的生物技术前沿领域。固定化酶已经广泛应用于生物化学、生物技术工程、生物医学工程、化学化工等方面，将在人类社会可持续发展中发挥重要作用。因而固定化酶载体的开发和利用更显得尤为重要。合成出具有较高酶活的载体，找出酶活与载体结构的关系，是解决固定化酶活性的关键问题。针对这一问题本文提出利用X射线微区分析的方法，对固定化木瓜蛋白酶，天门冬酰胺酶，乳酸脱氢酶，脂肪酶的活性位置进行定位分析，找到了几种酶活性的捕捉剂，指出了酶活与载体结构的关系，为固定化酶载体的合成与开发提供了可靠的依据。指出仅仅根据固定化酶的形貌来确定固定化酶的固定效果是不准确的，而实验结果表明我们的酶活定位方法是真实有效的。我们通过改变合成条件，研究出了合成新型大孔树脂的新工艺，利用微区分析的手段指导合成，进而通过悬浮聚合法合成出不同结构的聚合物载体，并通过大量实验找到了合成大孔树脂的严格条件，用合成出的新型大孔吸附树脂微球对木瓜蛋白酶，天门冬酰胺酶，进行了固定化，同时对用不同固定化方法制得的固定化酶的性质进行了表征和比较。结果令人满意。用性能优良的固定化酶制得酶反应器，显示其具有广泛的应用价值，为固定化酶载体的开发利用开辟了新途径。

全文目录


第1章 综述  13-24
  1.1 引言  13
  1.2 固定化酶的现状  13-18
    1.2.1 固定化酶的新技术  15-16
    1.2.2 固定化技术  16-17
    1.2.3 应用研究  17-18
  1.3 X-射线能谱微区分析  18-20
  1.4 固定化酶活性位置的定位  20-22
  1.5 本论文选题背景和主要研究内容  22-24
第2章 固定化酶的制备  24-63
  2.1 大孔树脂聚甲基丙烯酸甲酯微球固定化木瓜蛋白酶的制备与性质表征  24-41
    2.1.1 引言  25
    2.1.2 实验部分  25-27
      2.1.2.1 试剂与仪器  25-26
      2.1.2.2 实验内容  26-27
        2.1.2.2.1 大孔树脂的合成及形态表征  26
        2.1.2.2.2 固定化酶的制备  26-27
    2.1.3 酶活力的测定  27
    2.1.4 结果与讨论  27-39
      2.1.4.1 大孔树脂载体微球的形态分析  27-29
      2.1.4.2 大孔树脂固定化酶的制备条件  29-31
        2.1.4.2.1 固定化时间的影响  29-30
        2.1.4.2.2 pH对固定化的影响  30-31
        2.1.4.2.3 给酶量的影响  31
      2.1.4.3 固定化酶的性能表征  31-39
        2.1.4.3.1 不同pH对酶活力的影响  31-32
        2.1.4.3.2 反应温度对酶活力的影响  32-33
        2.1.4.3.3 热稳定性的研究  33-35
        2.1.4.3.4 不同酸碱介质中的稳定性  35
        2.1.4.3.5 储存时间及重复使用性的研究  35-37
        2.1.4.3.6 米氏常数K_m测定结果  37-38
        2.1.4.3.7 抑制剂的影响  38-39
        2.1.4.3.8 溶剂的影响  39
    2.1.5 结论  39-41
  2.2 大孔聚丙烯酸甲酯树脂微球固定化木瓜蛋白酶与性质研究  41-53
    2.2.1 引言  41
    2.2.2 实验部分  41-43
      2.2.2.1 试剂与仪器  41-42
      2.2.2.2 实验内容  42-43
        2.2.2.2.1 大孔树脂的合成及形态表征  42
        2.2.2.2.2 固定化酶的制备  42-43
        2.2.2.2.3 酶活力的测定  43
    2.2.3 结果与讨论  43-51
      2.2.3.1 大孔树脂载体微球的形态表征  43-45
      2.2.3.2 大孔树脂固定化酶的制备条件  45-47
        2.2.3.2.1 固定化反应中固定化温度的影响  45-46
        2.2.3.2.2 固定化反应中pH对固定化酶活力的影响  46
        2.2.3.2.3 固定化反应中给酶量的影响  46-47
      2.2.3.3 固定化酶的性质  47-51
        2.2.3.3.1 固定化酶的最适反应pH值  47
        2.2.3.3.2 固定化酶的最适反应温度(Tm)  47-48
        2.2.3.3.3 热稳定性的研究  48-50
          2.2.3.3.3.1 温育温度对固定化酶活力的影响  48-49
          2.2.3.3.3.2 温育时间对固定化活力的影响  49-50
        2.2.3.3.4 储存时间及重复使用性的研究  50-51
    2.2.4 结论  51-53
  2.3 大孔吸附树脂聚固定化L-天门冬酰胺酶的制备与研究  53-63
    2.3.1 引言  53
    2.3.2 实验部分  53-56
      2.3.2.1 材料与设备  54
        2.3.2.1.1 材料与试剂  54
        2.3.2.1.2 主要仪器设备  54
      2.3.2.2 大孔树脂甲基丙烯酸甲酯的制备  54
      2.3.2.3 固定化酶的制备  54-55
      2.3.2.4 游离酶及固定化酶的活力测定  55
        2.3.2.4.1 游离酶活力的测定  55
        2.3.2.4.2 固定化酶的活力测定  55
      2.3.2.5 游离酶及固定化酶米氏常数的测定  55-56
        2.3.2.5.1 游离酶米氏常数的测定  55
        2.3.2.5.2 固定化酶米氏常数的测定  55-56
    2.3.3 实验结果与讨论  56-61
      2.3.3.1 最优固定化条件的探讨  56-57
        2.3.3.1.1 不同pH值对固定化酶活力的影响  56
        2.3.3.1.2 给酶量对固定化酶活力的影响  56-57
        2.3.3.1.3 载体活化时间对固定化酶活力的影响  57
      2.3.3.2 固定化L-天冬酰酶理化性质的研究  57-61
        2.3.3.2.1 固定化L-天冬酰胺酶的米氏常数  57-58
        2.3.3.2.2 温度对固定化L-天冬酰酶活力的影响  58-59
        2.3.3.2.3 pH对固定化L-天冬酰酶活力的影响  59-60
        2.3.3.2.4 固定化和游离L-天冬酰酶对糜蛋白酶水解的稳定性  60
        2.3.3.2.5 固定化L-天冬酰胺酶使用稳定性  60-61
        2.3.3.2.6 固定化酶的低温存贮稳定性  61
    2.3.4 结论  61-63
第3章 固定化酶活性的表面微区分析  63-100
  3.1 固定化脂肪酶活性的X射线微区分析  65-76
    3.1.1 引言  66-67
    3.1.2 实验部分  67-68
      3.1.2.1 材料及仪器  67
      3.1.2.2 载体的合成及酶的固定化  67
      3.1.2.3 固定化脂肪酶的孵育  67-68
      3.1.2.4 固定化脂肪酶的对照实验  68
      3.1.2.5 不同条件下固定化脂肪酶的孵育  68
      3.1.2.6 固定化酶X射线微区分析  68
    3.1.3 结果与讨论  68-74
      3.1.3.1 固定化脂肪酶与捕捉剂的反应  68-69
      3.1.3.2 固定化脂肪酶的表面形貌  69-70
      3.1.3.3 最佳条件的选择  70-73
      3.1.3.4 不同结构载体固定化脂肪酶活性位置的定位分析  73-74
    3.1.4 结论  74-76
  3.2 固定化木瓜蛋白酶活性的X射线微区分析  76-84
    3.2.1 引言  76-77
    3.2.2 实验部分  77-78
      3.2.2.1 材料及仪器  77
      3.2.2.2 不同结构载体的制备及酶的固定化  77
      3.2.2.3 固定化木瓜蛋白酶的孵育  77
      3.2.2.4 固定化木瓜蛋白酶的定位的对照实验  77-78
      3.2.2.5 不同条件下定位固定化木瓜蛋白酶的孵育  78
      3.2.2.6 不同结构固定化酶载体X-射线微区分析  78
    3.2.3 结果与讨论  78-82
      3.2.3.1 固定化木瓜蛋白酶与捕捉剂的反应  78-79
      3.2.3.2 固定化木瓜蛋白酶的表面形貌  79-80
      3.2.3.3 微区定位的最佳条件的选择  80
      3.2.3.4 不同结构固定化木瓜蛋白酶的定位分析  80-82
    3.2.4 结论  82-84
  3.3 固定化L-天门冬酰胺酶活性的X射线微区分析  84-92
    3.3.1 引言  84
    3.3.2 实验部分  84-85
      3.3.2.1 材料及仪器  85
      3.3.2.2 载体的制备及酶的固定化  85
      3.3.2.3 固定化L-天门冬酰胺酶的孵育  85
      3.3.2.4 固定化L-天门冬酰胺酶定位的对照实验  85
      3.3.2.5 不同条件下固定化L-天门冬酰胺酶定位的孵育  85
      3.3.2.6 不同结构固定化酶载体的X-射线微区分析  85
    3.3.3 结果与讨论  85-90
      3.3.3.1 固定化L-天门冬酰胺酶与捕捉剂的反应  86
      3.3.3.2 固定化L-天门冬酰胺酶的表面形貌  86-87
      3.3.3.3 微区定位最佳条件的选择  87-89
      3.3.3.4 不同结构载体固定化L-天门冬酰胺酶活性位置的定位分析  89-90
    3.3.4 结论  90-92
  3.4 固定化乳酸脱氢酶活性的X射线微区分析  92-100
    3.4.1 引言  92-93
    3.4.2 实验部分  93-94
      3.4.2.1 材料及仪器  93
      3.4.2.2 大孔载体的合成及酶的固定化  93
      3.4.2.3 固定化乳酸脱氢酶的孵育  93-94
      3.4.2.4 固定化乳酸脱氢酶的定位对照实验  94
      3.4.2.5 不同条件下固定化乳酸脱氢酶的孵育  94
      3.4.2.6 固定化酶的X-射线微区分析  94
    3.4.3 结果与讨论  94-98
      3.4.3.1 固定化乳酸脱氢酶与捕捉剂的反应  94-95
      3.4.3.2 固定化乳酸脱氢酶的表面形貌  95-96
      3.4.3.3 固定化酶定位最佳条件的选择  96
      3.4.3.4 对不同结构固定化乳酸脱氢酶活性位置的定位分析  96-98
    3.4.4 结论  98-100
第4章 固定化木瓜蛋白酶的应用--大孔树脂微球固定化木瓜蛋白酶填充床反应器的试制研究  100-106
  4.1 引言  100
  4.2 材料与方法  100-102
    4.2.1 材料  100
    4.2.2 蛋白质含量测定  100-101
    4.2.3 酶反应器的试制  101
    4.2.4 底物和产物浓度的测定  101-102
    4.2.5 底物和降解产物的平均相对分子质量分布测定  102
  4.3 结果  102-104
  4.4 讨论  104-106
第5章 结论  106-109
参考文献  109-119
附录  119-121
致谢  121

相似论文

  1. 分布式移动多载舰OTHR系统姿态测量方法的研究,P228.4
  2. 配电网故障定位与网络重构算法的研究,TM727
  3. 基于UWB脉冲信号的测距定位技术,TN929.5
  4. 基于直扩序列的多普勒无线定位技术研究,TN914.42
  5. 医用电磁导航实验系统的研究,TN966
  6. 基于嵌入式图像处理单元的运动目标跟踪系统研究,TP391.41
  7. 无线传感器网络中定位攻击检测技术研究,TP212.9
  8. 高精度重型数控机床C轴分度装置的设计及分析,TG659
  9. 电视文化生态的建构,G220
  10. 草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆、表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位研究,S941.41
  11. 基于聚焦扫描光声成像的光声信号分析及医学应用,R318.51
  12. 大红山铁矿井下人员跟踪定位系统的优化研究,TN929.5
  13. 无线协作中继位置的优化研究,TN925
  14. 高性能聚丙烯腈的合成与表征,O631.3
  15. 低空空域监视对策研究,V328.3
  16. 小麦黄花叶病毒（WYMV）RNA2编码基因的功能研究,S435.121
  17. 王阳明教化哲学研究,B248.2
  18. 基于粒子滤波的自主机器人视觉目标跟踪研究,TP242
  19. 中华校园团购网营销策略研究,F274
  20. 单细胞中光敏化单态氧的间接成像,Q2-3
  21. 水稻对黑条矮缩病的抗性遗传分析及基因定位,S511

中图分类: > 数理科学和化学 > 化学 > 分析化学 > 元素及化合物的分离方法 > 其他
© 2012 www.xueweilunwen.com