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TRAIL抗肿瘤作用的研究

作　者: 李小安
导　师: 房殿春
学　校: 第三军医大学
专　业: 内科学
关键词: 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体凋亡 5-氟尿嘧啶阿司匹林 DNA甲基转移酶 BCl-2家族成员
分类号: R73-36
类　型: 博士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

TRAIL是TNF家族的新成员，其基因是Wiley等于1995年发现的。TRAIL能与5种受体结合，即TRAIL-R1／DR4，TRAIL-R2／DR5，TRAIL-R3／DcR1，TRAIL-R4／DcR2和OPG。其与DR4、DR5结合可以诱导细胞凋亡，但与DcR1、DcR2和OPG结合不能诱导细胞凋亡。实验证实TRAIL对来源于几乎所有系统恶性肿瘤的大部分细胞系均有杀伤作用，而对正常细胞并无杀伤作用，这一特性有可能使其成为新型的抗肿瘤药物。但并非所有的肿瘤细胞都对TRAIL都敏感，也存在耐药性问题。因此如何改变TRAIL的耐药现象，探索提高其敏感性的方法已成为当前的重要研究课题。本课题利用大肠杆菌表达蛋白，在成功地分离纯化和鉴定TRAIL蛋白的基础上，我们研究了TRAIL对结肠癌细胞系SW480和肝癌细胞系SMMC-7721的作用；5-Fu与TRAIL联合应用对结肠癌细胞系SW480的作用；阿司匹林与TRAIL联合应用对肝癌细胞系SMMC-7721的作用，并从阿司匹林影响Bc1-2家族蛋白表达角度阐明二者产生协同作用的机理；肝癌SMMC-7721细胞转入反义DNMT1基因片段后对TRAIL敏感性的改变，并从Bc1-2家族蛋白表达改变的角度阐明其机理。上述研究采用的方法与结果如下： 1)SDS-PAGE结果表明，我们所提的蛋白分子量约20.1KDa，Western blot证实该蛋白为TRAIL。 2)MTT法和TUNEL法表明TRAIL对结肠癌SW480细胞有较好的杀伤作用，呈现典型的量效和时效关系。TRAIL对肝癌SMMC-7721细胞也有类似作用。5-Fu与TRAIL合用对结肠癌SW480细胞有协同作用。HE染色光镜观察和电镜观察发现经TRAIL作用后的细胞具有核第三军医大学博士研究生论文TRAIL抗肿瘤作用的研究浓缩、碎裂、凋亡小体形成等凋亡的形态特征。 3）MTT法和流式细胞仪检测证实TRAIL与阿司匹林合用有协同作用，Western blot法结果表明阿司匹林可抑制Be12的表达，对Bax 的表达无影响。阿司匹林和 TRAIL产生协同作用与其抑制 BC12的表达的作用有一致的量效关系。 4）MTT法和TUNEL法测得的结果显示，肝癌SMMC－7721细胞转入反义DNMTI基因片段后对TRAIL更加敏感。免疫组化染色和流式细胞仪检测发现反义DNMTI基因片段转入肝癌SMMC－7721细胞后 BclZ家族成员Bax、Bad的表达增强，但BclZ的表达无改变。由此我们得出以下结论：（1）TRAIL 可通过诱导凋亡的方式有效地杀死结肠癌8＊480细胞和肝癌SMMC－7刀1细胞。（2）5－FU与TRAIL 联合应用对 SW480细胞有协同抗肿瘤的作用。（）阿司匹林与 TILAIL 联合应用有协同杀死肿瘤细胞的作用，该作用的产生与阿司匹林抑制肿瘤细胞表达B。12有关。（4）反义DNMTI基因片段转入SMMC－7721 细胞后，细胞对TRAIL的敏感性增强，这种敏感性的改变可能与反义 DNMTI基因片段增强Bax、Bad的表达有关。

全文目录

英文缩写词一览表  3-4
英文摘要  4-6
中文摘要  6-8
论文正文 TRAIL抗肿瘤作用的研究  8-75
  前言  8-10
  第一部分 TRAIL的分离纯化和鉴定  10-18
  第二部分 TRAIL的体内外抗肿瘤作用研究  18-42
  第三部分反义甲基化转移酶基因片段转入肝癌SMMC-7721细胞对TRAIL敏感性的影响  42-53
  结论  53-54
  致谢  54-55
  照片及说明  55-66
  参考文献  66-75
文献综述  75-95
  参考文献  84-95
研究生期间撰写的论文及编写专著目录  95

TRAIL抗肿瘤作用的研究

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