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凋亡因子在胰岛素抵抗及其干预组大鼠靶组织中的表达研究

作　者: 王蔚琛
导　师: 李瑞峰
学　校: 山东大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 胰岛素抵抗 大鼠 Wistar 细胞凋亡 二甲双胍 氨基胍 川芎嗪
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：通过出生当日Wistar大鼠注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立胰岛素抵抗(IR)模型,观察该模型32周龄时的凋亡因子在各组织中的表达情况。采用不同药物干预治疗,探讨凋亡因子表达对胰岛素抵抗及其干预组各组织中的表达情况,以探讨其表达与胰岛素抵抗程度的关系。方法：1.实验动物及分组：出生当日Wistar大鼠,通过腹腔注射STZ (90mg/kg)复制IR模型。常规伺养至8周龄,符合糖耐量试验餐后2小时血糖≥11.1mmol／L或空腹血糖≥7. Ommol/L条件者选入本研究。设立正常对照组(NC组)、胰岛素抵抗对照组(IR组)、二甲双胍(MET组)及川芎嗪+氨基胍(TMP+AG组)治疗组。2.空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)检测：分别于造模第8周和32周断尾取空腹血,检测FPG,留取血清检测FINS,根据公式(FPG·FINS)/22.5计算胰岛素抵抗指数(IRI)。3.病理学检测：肾组织学切片行苏木素-伊红(HE)染色,观察肾组织形态学变化。4.免疫组织化学染色：观察肾、肝、脑组织凋亡因子Caspase-3蛋白、Fas蛋白表达。5.免疫印记实验(western blot, WB)观察肾、肝、脑组织中凋亡因子Caspase-3蛋白、Fas蛋白表达。6.反转录RT-PCR:分别检测肾、肝、脑组织Caspase-3、Fas-L和P53的mRNA的表达水平。结果：1.FPG和FINS检测结果：8周龄时,模型组的FPG、FINS和IRI含量均高于NC组(P<0.01)。用药24周(32周龄),MET组和TMP+AG组FPG和FINS较IR组进一步降低(P<0.01)；MET组和TMP+AG组FPG与NC组差异无统计学意义,FINS和IRI仍高于NC组。主要指标胰岛素抵抗指数变化,IR组明显高于NC组(P<0.01),MET组和TMP+AG组均明显低于IR组(p<0.01),且TMP+AG组低于MET组(p<0.05)2.病理学检测结果：HE染色结果显示,IR组可见局部轻度系膜细胞增生,肾小管上皮细胞核固缩碎裂、细胞质浓缩,嗜酸性增强,部分结构消失并分散成多块；但周围无炎症反应,肾小管轮廓清晰,基底膜仅剩轮廓。IR组肝组织细胞表现为核固缩或破碎,嗜酸性增强,与周围细胞连接松散。IR组脑组织可见神经细胞核深染、固缩、细胞体积缩小。3.免疫组化结果：Caspase-3蛋白在各组肝、脑、肾组织中均有表达,Caspase-3染色主要位于胞浆,呈细颗粒棕黄色,远曲小管(管腔宽而规则)和近曲小管(管腔狭窄而不规则)均有表达,以远曲小管明显,肾小球Caspase-3染色阴性。NC组肾组织可见少量阳性细胞,着色浅。IR组阳性细胞数明显增加；MET组和TMP+AG组阳性细胞着色较胰岛素抵抗组减少。Fas蛋白相对在肝、脑组织中表达较多,在肾组织中表达较少。Fas蛋白主要表达在肝组织细胞的胞膜和胞浆中,肝细胞胞膜中可见棕色阳性物质。4.免疫印记实验结果(western blot,WB):caspase-3蛋白在肝、脑、肾中表达趋势与免疫组化结果基本一致,在肝、脑、肾各组织中表达情况如下：NC组中表达相对较少,IR组、MET组和TMP+AG组中表达较NC组均明显增多(P<0.05), MET组和TMP+AG组均较IR组明显减低(P<0.05),且TMP+AG组比MET组减少更显著(P<0.05)。肝组织中Fas的表达情况：与NC组相比较,IR组和MET组表达明显升高(P<0.05)；经过药物干预后,与IR组比较,MET组和TMP+AG组均减少,但MET组改变没有差异性(P>0.05),TMP+AG组表达降低(P<0.05)。5.反转录RT-PCR结果：caspase-3mRNA在肝、脑、肾中表达趋势与免疫组化结果基本一致,Fas-LmRNA在肝、脑、肾组织中均有表达,其中在肝脏组织表达最为丰富,情况如下：NC组中表达相对较少,IR组、MET组和TMP+AG组中表达较NC组均明显增多(P<0.05),MET组和TMP+AG组均较IR组明显减少(P<0.01),且TMP+AG组比MET组减少更显著(P<0.05)。P53mRNA在肝、脑、肾组织中均有表达,但是脑组织中表达较少,与caspase-3mRNA、Fas-LmRNA表达趋势基本一致。结论：1.STZ可以诱导出生当日Wistar大鼠产生IR。该模型FPG、FINS、IRI明显高于正常对照大鼠。该模型多种组织中不同凋亡因子表达有明显改变,提示胰岛素抵抗程度的变化与不同凋亡因子表达改变的参与有关。2. MET、TMP+AG组通过二甲双胍、川芎嗪+氨基胍药物的干预,可明显降低胰岛素抵抗程度,同时也下调caspase-3、FAS蛋白,进一步佐证该胰岛素抵抗的程度的确与凋亡因子caspase-3、FAS参与有关。MET、TMP+AG组胰岛素抵抗程度与凋亡因子的改变程度不同,以TMP+AG组改变更加明显,提示川芎嗪+氨基胍干预过程凋亡因子的影响更大。其确切机制尚待进一步探讨。3.结果显示,胰岛素抵抗大鼠多种器官组织caspase-3、FAS-L和P53的转录及翻译水平均明显上调,应用二甲双胍、川芎嗪加氨基胍药物干预可下调其表达,并伴随不同程度的胰岛素抵抗缓解。提示胰岛素抵抗的形成及程度与促凋亡因子表达正相关。

全文目录


中文摘要  6-9
ABSTRACT  9-13
符号说明  13-15
前言  15-17
材料与方法  17-30
结果  30-33
讨论  33-39
结论  39-40
附录  40-50
参考文献  50-56
综述  56-62
  参考文献  60-62
致谢  62-63
攻读硕士期间发表的学术论文  63-64
学位论文评阅及答辩情况表  64

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病
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