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可溶性Tie2融合蛋白对尿毒症腹膜透析大鼠血管新生的影响

作　者: 刘鑫鑫
导　师: 赵占正
学　校: 郑州大学
专　业: 内科学
关键词: 可溶性Tie2融合蛋白血管生成素-2 腹膜透析血管新生
分类号: R692.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景和目的终末期肾脏病(end-stage renal disease, ESRD)已成为21世纪全人类面临的主要公共健康问题之一。腹膜透析(peritoneal dialysis, PD)是终末期肾脏病患者主要的替代治疗方式之一。由于其具有简便的家居模式、不需要依赖特殊设备、对血流动力学影响小、交叉感染率低、更好的残余肾保护功能等优点,已被越来越多的终末期肾脏病患者所接受。长期腹膜透析后腹膜发生血管新生和通透性增加,导致腹膜超滤功能受损,乃至发生超滤衰竭(ultrafiltration failure,UFF)。超滤衰竭是患者被迫退出腹膜透析的主要原因之一。对发生超滤衰竭患者的腹膜行病理学检查,发现腹膜组织确实存在新生血管增多的现象。目前认为,腹膜新生血管的形成在超滤衰竭的诸多发生机制中居于主导地位。近期发现,血管生成素-2(angiopoietin, Angpt-2)及其受体Tie-2是与血管新生和功能改变密切相关的一类细胞因子。血管生成素-2的受体Tie-2的细胞外结构域在蛋白酶裂解作用下可脱落,形成可溶性的Tie-2受体；其可以和Tie-2竞争性结合血管生成素-2,从而抑制其生物学活性的发挥。研究发现,使用重组的可溶性Tie2融合蛋白(soluble Tie2 fusion protein, sTie2/Fc)可以抑制肿瘤的血管新生,但其是否能抑制腹膜的血管新生尚未见报导。因此,本研究利用尿毒症腹膜透析大鼠模型模拟人体内腹膜透析过程,观察使用重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白干预后,血管生成素-2和微血管密度(Microvessel Density, MVD)在尿毒症腹膜透析大鼠腹膜组织的表达变化,并初步探讨其可能的作用机制,为干预腹膜血管新生提供新的靶点,为临床防治血管新生导致的腹膜透析超滤衰竭提供理论依据。方法48只雄性SD大鼠,清洁级,体质量180-200g。按照5/6肾切除法制作尿毒症大鼠模型,在此基础上进一步构建腹膜透析模型。假手术组大鼠行双肾肾包膜剔除术。按随机数字表法分为以下6组,每组各8只：A：正常对照组、B：假手术组、C：尿毒症非腹透组、D：4.25%腹透组、E：重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.25ug/100g干预组、F：重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.50ug/100g干预组。腹透组按照每天4.25%腹透液3ml/100g大鼠体重规律腹透28天。规律腹透期间,干预组给予sTie2/Fc隔天1次皮下注射,共计14次。28天腹透及干预治疗结束后,取以上各组大鼠腹膜组织,分别用免疫组织化学染色法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测腹膜组织血管生成素-2在蛋白、mRNA水平的表达情况；CD34染色观察腹膜组织微血管密度。对以上数据进行统计学分析,选取P<0.05为有统计学意义。结果1.与正常组相比较,假手术组大鼠腹膜组织Angpt-2 mRNA、蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。尿毒症非腹透组、4.25%腹透组Angpt-2 mRNA、蛋白表达均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)；4.25%腹透组Angpt-2 mRNA、蛋白表达显著高于尿毒症非腹透组,差异有统计学意义(P<0.05)。重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.25ug/100g干预组和0.50ug/100g干预组Angpt-2 mRNA、蛋白表达均显著低于4.25%腹透组,差异有统计学意义(均P<0.05)；与重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.25ug/100g干预组相比,重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.50ug/100g干预组Angpt-2 mRNA、蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.与正常组相比较,假手术组大鼠腹膜组织MVD值变化差异无统计学意义(P>0.05)。尿毒症非腹透组、4.25%腹透组MVD值均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)；4.25%腹透组MVD值显著高于尿毒症非腹透组,差异有统计学意义(P<0.05)。重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.25ug/100g干预组和0.50ug/100g干预组MVD值均显著低于4.25%腹透组,差异有统计学意义(均P<0.05)；与重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.25ug/100g干预组相比,重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.50ug/1 00g干预组Angpt-2 MVD值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3.Angpt-2的蛋白表达量和MVD呈正相关,Angpt-2和尿毒症长期腹膜透析时血管新生相关。结论1.尿毒症环境和高糖腹透液的刺激均可以使大鼠腹膜组织Angpt-2在基因和蛋白水平的表达上调；使腹膜组织毛细血管生成增多,且可能与Angpt-2基因和蛋白表达上调有关。2.重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白可以抑制尿毒症腹膜透析大鼠腹膜新生血管的形成,并且其抑制作用的强弱与药物剂量相关。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-12
中英文缩略词对照表  12-13
1 前言  13-16
2 材料与方法  16-25
  2.1 实验材料  16-18
  2.2 实验方法  18-20
  2.3 免疫组织化学法检测大鼠腹膜组织中Angpt-2、CD34的蛋白表达  20-21
  2.4 RT-PCR法检测大鼠腹膜组织中Angpt-2 mRNA水平的表达  21-24
  2.5 统计学方法  24-25
3 结果  25-34
  3.1 尿毒症腹膜透析大鼠模型制作结果  25-26
  3.2 重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白对大鼠腹膜组织Angpt-2、CD34蛋白水平表达的影响  26-29
  3.3 重组大鼠可溶性Tie2融合蛋白对大鼠腹膜组织Angpt-2 mRNA水平表达的影响  29-31
  附图  31-34
4 讨论  34-39
  4.1 尿毒症腹膜透析大鼠模型的构建  34-35
  4.2 血管生成素-2及其可溶性受体融合蛋白对尿毒症腹膜透析大鼠腹膜血管新生的影响及机制  35-39
结论  39-40
参考文献  40-43
腹膜透析超滤衰竭的机制与防治  43-60
  一、腹膜的形态结构与腹膜透析原理  43-44
  二、腹膜超滤衰竭与腹膜转运类型  44-46
  三、腹膜超滤衰竭机制  46-52
  四、腹膜超滤衰竭防治的新进展  52-54
  五、总结  54-55
  参考文献  55-60
个人简历和在读期间发表论文情况  60-61
致谢  61

可溶性Tie2融合蛋白对尿毒症腹膜透析大鼠血管新生的影响

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