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NF-κB在卵巢切除小鼠牙槽骨表达及其对成骨能力的影响

作　者: 张丰伟
导　师: 贾智
学　校: 天津医科大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: NF-κB 卵巢切除小鼠成骨能力牙槽骨骨质疏松症
分类号: R780.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：为了探寻雌激素缺乏所致的骨质疏松症牙槽骨成骨能力与NF-κB的活化之间是否存在内在的联系,从而为骨质疏松症患者牙周炎的治疗提供研究基础。本实验通过卵巢切除建立雌激素缺乏小鼠模型,运用组织学方法观察卵巢切除小鼠组织病理学改变,逆转录PCR检测小鼠牙槽骨中成骨相关标记物的表达情况,以及免疫组化法和免疫印迹法检测小鼠牙槽骨中核转录因子κB (NF-κB)的活化情况和表达量的不同。方法：1.取20只3月龄雌性C3H的小鼠,随机分为两组：假手术组(A组)和卵巢切除组(B组)。切除双侧卵巢(或假手术),建立小鼠雌激素缺乏小鼠模型；2.10周后,断颈处死两组小鼠。取小鼠牙槽骨,经过固定、脱钙、包埋、切片和HE染色等步骤,观察小鼠组织学差异；3.处死后,立即取小鼠牙槽骨,剔除软组织后,提取总RNA,经过逆转录、PCR和电泳等过程,检测OCN和Runx2等成骨相关分子mRNA的表达；4.采用免疫组化方法,观察两组小鼠牙槽骨中NF-κB蛋白表达情况；5.应用免疫印迹法,经蛋白提取、转膜、封闭和显影等步骤,定量分析两组小鼠牙槽骨中NF-κB蛋白表达的差异。结果：1.卵巢切除小鼠,骨组织学表现为：骨小梁变细、数目减少、密度降低、结构不完整,骨吸收陷窝样结构增多；2.RT-PCR结果显示：卵巢切除小鼠牙槽骨OCN mRNA相对表达量较假手术组低(0.1668±0.0470和0.5391±0.1293, p<0.05); Runx2 mRNA相对表达量较假手术组低(0.3064±0.0483和0.5817±0.1131,P<0.05)；3.免疫组化结果显示：卵巢切除小鼠的骨组织中NF-κB弱阳性表达；4.Western-blot结果显示：卵巢切除小鼠牙槽骨中的NF-κB蛋白活化形式P65相对表达量较假手术组高(0.5854±0.0430,0.1045±0.0270,p<0.05)。结论：1.雌激素缺乏可引起牙槽骨成骨能力的降低；2.雌激素缺乏导致的NF-κB信号通路激活,NF-κB可能参与抑制牙槽骨成骨形成过程。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语/符号说明  10-12
前言  12-16
  研究现状、成果  12-15
  研究目的、方法  15-16
1 对象和方法  16-27
  1.1 对象及分组  16
  1.2 设备及仪器  16
  1.3 试剂  16-17
  1.4 液体配制  17-18
  1.5 动物造模及标本制作  18-19
  1.6 HE染色  19
  1.7 RT-PCR检测OCN和Runx2  19-23
  1.8 NF-κB免疫组化染色  23
  1.9 Western-blot检测NF-κB表达情况  23-27
  1.10 数据统计学分析  27
2 结果  27-30
  2.1 HE染色  27
  2.2 RNA电泳结果  27
  2.3 OCN和Runx2扩增情况  27-29
  2.4 NF-κB免疫组化染色结果  29-30
  2.5 NF-κB的Western-blot结果  30
3 讨论  30-42
  3.1 骨形成的相关调节因素  30-34
    3.1.1 雌激素及其受体  31
    3.1.2 甲状旁腺素  31-32
    3.1.3 瘦素  32-33
    3.1.4 降钙素  33
    3.1.5 OCN和Runx2  33-34
  3.2 NF-κB信号通路  34-35
  3.3 雌激素与NF-κB信号通路的作用机制  35-37
  3.4 NF-κB与骨代谢的关系  37-40
    3.4.1 成骨细胞中NF-κB的基因模型  37-38
    3.4.2 NF-KB与破骨作用的关系  38
    3.4.3 NF-κB与成骨作用的关系  38-40
  3.5 小结  40-42
结论  42-43
参考文献  43-50
发表论文和参加科研情况说明  50-51
综述 NF-κB在骨代谢中的作用的研究进展  51-65
  综述参考文献  58-65
致谢  65-66

NF-κB在卵巢切除小鼠牙槽骨表达及其对成骨能力的影响

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