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FTY720对EAE大鼠的防治作用及脑组织中BCL-2、FAS蛋白表达的影响

作　者: 刘荣
导　师: 李罗清；谭利明
学　校: 中南大学
专　业: 神经病学
关键词: 多发性硬化实验性自身免疫性脑脊髓炎芬戈莫德 BCL-2 FAS
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：观察芬戈莫德(Fingolimod, FTY720)对Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)的发病情况、组织病理变化及中枢神经系统内凋亡相关蛋白BCL-2及FAS表达水平的影响,比较不同剂量FTY720的干预与泼尼松干预的疗效差别及各剂量FTY720之间的疗效差别,探讨FTY720对EAE模型的影响及可能的作用机制,为探索多发性硬化(Multiple sclerosis, MS)新的治疗途径及更合理有效的用药提供有意义的实验依据。方法：用豚鼠脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate, GPSCH)、完全福氏佐剂(complete freund’s adguvant, CFA)、百日咳疫苗原浆液(pertussis vaccine, PV)致敏中年雌性Wistar大鼠,建立EAE模型,并用不同剂量FTY720、泼尼松干预治疗。70只中年雌性Wistar大鼠随机分成7组,每组10只：A组：正常对照组；B组：EAE模型组,GPSCH+CFA+PV;C组：EAE+FTY720 0.03mg/kg?d; D组：EAE+FTY720 0.1mg/kg?d;E组：EAE+FTY720 0.3mg/kg?d;F组：EAE+FTY720 1.0mg/kg?d;G组：EAE+泼尼松5mg/kg?d。将免疫抗原注射日定为第0天,不同剂量FTY720组H、泼尼松组大鼠在抗原免疫后第1天开始,分别给予相应剂量药物干预,每天上午一次,直直至处死。于大鼠免疫后第18天终止实验,处死所有大鼠。观察各组大鼠发病、体重变化及神经功能评分情况。取大鼠脑纰织切片进行检测：用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色后在光镜下进行炎性病灶计数；用罗可沙尔坚牢蓝-焦油紫(Luxol fast blue, LFB)染色后在光镜下观察脱髓鞘情况。免疫组化方法和图像分析软件(Image-Pro Plus6.0 software)测量各组大鼠中枢神经系统(central nervous, CNS)侧脑室周围组织BCL-2蛋白和FAS蛋白的表达情况。统计学分析采用SPSS17.0软件包进行。结果：1.各组大鼠的临床表现观察：①A组无大鼠发病。②与B组比较,C组能减轻临床症状,减少体重下降,延长潜伏期(p<0.05),对发病率无影响(p>0.05)；D组、E组、F组和G组能降低发病率、延长潜伏期、减轻临床症状、减少体重下降(p<0.05)。③与C组比较,D组、E组、F组和G组临床症状减轻,体重损失减少,潜伏期延长(p<0.05)。④与G组比较,D组、E组发病率、潜伏期、临床症状、体重损失差别无显著性(p>0.05),而F组能延长潜伏期,减少体重下降(p<0.05)。2.各组大鼠CNS的病理结果观察：①HE染色显示A纽大鼠侧脑室周围白质无炎性病灶。②与B组比较,C组、D组、E组、F组和G组炎性病灶数减少(p<0.05)。③与C组比较,D组、E组、F组和G组炎性病灶数减少(p<0.05)。④与G组比较,D组、E组炎性病灶数差别无显著性(p>0.05),而F组炎性灶数减少(P<0.05)。⑤LFB染色显示A组大鼠侧脑室周围白质无髓鞘脱失,B组有较多典型脱髓鞘病灶,C组、D组、E纠组、F组和G组中仪少数脱髓鞘病灶。3.各纰大鼠CNS白质免疫组化观察结果：①与A纰比较,B纰BCL-2蛋白、FAS蛋白的表达水平明显升高(p<0.05)。②与B纰比较,C纰、D绀、E组.、F组和G组BCL-2蛋白、FAS蛋白表达水平降低(p<0.05)。③与C组比较, D组、E组、F组和G组BCL-2蛋白、FAS蛋白表达水平降低(p<0.05)。④与G组比较,D组、E组BCL-2蛋白、FAS蛋白表达差别无显著性(p>0.05),而F组BCL-2蛋白、FAS蛋白表达水平降低(p<0.05)。结论：1.FTY720对EAE大鼠具有防治作用,且其作用可能在一定程度上呈剂量相关性。2.FTY720对EAE大鼠的防治机制之一可能是通过下调脑组织中BCL-2蛋白的表达,减轻EAE中枢神经系统的炎性反应。3.FAS蛋白在脑组织中表达上调介导的细胞损伤可能是EAE发病的机制之一。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-12
第一章前言  12-14
第二章材料和方法  14-18
  2.1 实验材料和仪器  14-15
  2.2 实验步骤和方法  15-17
  2.3 结果观察和判断标准  17
  2.4 统计分析  17-18
第三章结果  18-29
  3.1 各组大鼠的临床表现观察  18-19
  3.2 各组大鼠CNS的病理结果观察  19-21
  3.3 各组大鼠CNS的免疫组化观察结果  21-23
  3.4 附图  23-29
第四章讨论  29-32
  4.1 BCL-2下调参与EAE的转归  29
  4.2 FAS蛋白参与EAE发病  29
  4.3 FTY720对急性期EAE的保护机制  29-31
  4.4 本实验的不足之处及需要改进的地方  31-32
第五章结论  32-33
参考文献  33-37
综述  37-47
  参考文献  43-47
致谢  47

FTY720对EAE大鼠的防治作用及脑组织中BCL-2、FAS蛋白表达的影响

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