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高、低剂量率γ线照射对哺乳类细胞生长存活及DNA损伤修复的影响

作　者: 曹丽丽
导　师: 周新文
学　校: 苏州大学
专　业: 放射医学
关键词: 低剂量率高剂量率剂量依存关系 PLD DSBs
分类号: R818
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:通过高剂量率(high-dose-rate,or acute ,1.0Gy/min)、低剂量率(low-dose rate,or chronic, 0.347mGy/min)γ线对哺乳类细胞的照射,研究照射后哺乳类细胞的生长存活情况,探讨γ线引起的细胞损伤修复机制。方法:(1)采用Western Blot方法从蛋白水平检测DNA损伤调控因子P53、P21、磷酸化共济失调-毛细血管扩张症致病基因(Ataxia-Telangiectasia mutated,ATM)在本研究所用细胞中的表达,为下一步研究提供可行性。(2)血细胞计数板计数法测定低剂量率照射对细胞生长曲线的影响;克隆形成率测定指数增长期及密集抑制期细胞高、低剂量率照射下的存活率。(3)采用免疫荧光染色法检测有无ATM抑制剂及DNA依赖性蛋白激(DNA-dependent protein kinase, catalytic subunit, DNA-PKcs )抑制剂作用于密集抑制的稳相细胞照射后DNA双链断裂(DNA double-strand breaks,DSBs)的生物标记物γ-H2AX的免疫荧光表达。结果:1、Western Blot结果显示:高剂量率(1.0Gy/min)5.0Gy照射后,三种哺乳类细胞中,磷酸化ATM均有表达,磷酸化P53、P21也有一定程度的诱导表达。2、低剂量率照射组的HE-4细胞及MRC5-hTERT细胞相比较与未照射组生长速度减慢,而C3H 10T1/2细胞没有明显变化;3、指数增长期期细胞及密集抑制状态下高剂量率(1.0Gy/min)照射的细胞存活率均低于低剂量率(0.347mGy/min)照射。4、高剂量率(1.0Gy/min)γ线照射密集抑制的稳相细胞后,随着培养时间的延长,细胞的存活率增高。5、γ-H2AX免疫荧光染色提示ATM抑制剂及DNA-PKcs抑制剂处理后的密集抑制状态的细胞在高、低剂量率照射下的DSBs均高于对照组。结论:1、磷酸化ATM、磷酸化P53、P21在照射后的细胞中均有表达。2、高剂量率与低剂量率γ线对指数增长期及密集抑制状态下的细胞照射后,均存在明显的剂量依存关系;相同剂量照射,低剂量率照射下的细胞存活率显著高于高剂量率照射组。3、低剂量率γ线照射下细胞的生长速度减慢,以人纤维细胞最为明显。4、密集抑制的稳相细胞高剂量率γ线照射后存在潜在致死性损伤修复。5、ATM在高、低剂量率γ线照射诱导的DSBs修复中均发挥重要作用。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
引言  9-13
第一部分磷酸化ATM、P53、P21 在细胞照射后的表达  13-19
  材料与方法  13-16
  实验结果  16
  讨论  16-19
第二部分高、低剂量率对哺乳类细胞生长增殖及存活率的影响  19-27
  材料和方法  19-22
  结果  22-25
  讨论  25-27
第三部分高、低剂量率照射下辐射诱导的细胞修复研究  27-37
  材料和方法  27-30
  结果  30-34
  讨论  34-37
讨论  37-40
结论  40-41
参考文献  41-46
缩略简称  46-47
发表论文及其他  47-48
致谢  48-49

高、低剂量率γ线照射对哺乳类细胞生长存活及DNA损伤修复的影响

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