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RNA干扰沉默细胞周期蛋白依赖激酶8基因对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响

作　者: 袁寅
导　师: 朱兴国
学　校: 苏州大学
专　业: 普外科
关键词: 结肠癌 CDK8 β-catenin 增殖凋亡
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景与目的:CDK8(细胞周期蛋白激酶8)是CDK(细胞周期蛋白激酶)家族的一个成员,其主要在基因转录过程中发挥重要作用。有研究表明,CDK8的过表达能正向促进β-catenin(β-连环蛋白)的表达,并通过调控WNT/β-catenin通路,在肿瘤的发生发展过程中起着关键作用。RNA干扰(RNAi)能高效特异地调低基因表达,已广泛应用于肿瘤治疗的研究。本研究旨在采用RNA干扰技术转染结肠癌HCT116细胞,观察其对人结肠癌细胞HCT116增殖凋亡的影响,探讨CDK8基因在结肠癌中的作用,为进一步研究结肠癌的基因治疗奠定基础。方法:①设计制备针对CDK8基因的小干扰RNA序列,以脂质体(lipofectamineTM2000)为载体转染人结肠癌细胞株HCT116,流式细胞仪检测转染效率,寻求最佳转染效率的条件;②将CDK8-siRNA转染结肠癌细胞株HCT116,分别采用RT-PCR以及Western印迹检测转然后HCT116细胞CDK8和β-连环蛋白在mRNA和蛋白水平表达情况;③分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,流式细胞术(FCM)检测计算对照组和实验组细胞的吸光度值以及细胞周期,细胞凋亡的情况。结果:①细胞数约为每孔1.5×105个、siRNA为80pmol,Lipofectamine2000与siRNA比例为4ul:4ul(6孔板)时,有较佳的转染效率,继续提高siRNA浓度并不能明显提高转染效率;②转染CDK8-siRNA后转染组CDK8和β-catenin的mRNA和蛋白表达明显下降。③转染了CDK8-siRNA的结肠癌细胞HCT116吸光度值降低,增殖活力下降,生长缓慢,细胞凋亡增加,且大部分停留在G0/G1期。结论:①CDK8-siRNA能有效沉默结肠癌细胞株HCT116CDK8基因的过表达;②CDK8-siRNA能影响结肠癌细胞株HCT116WNT/β-catenin通路的信号传导;③CDK8-siRNA转染可抑制结肠癌细胞株HCT116增殖并能加速其凋亡,对其周期亦有明显的影响。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-8
序言  8-10
第一部分 CDK8RNA 干扰序列的设计与验证  10-25
  材料  10-11
  方法  11-18
  结果  18-21
  讨论  21-24
  结论一  24-25
第二部分 RNAi 沉默CDK8 基因表达对结肠癌HCT116 细胞增殖凋亡影响的实验研究  25-36
  材料  25
  方法  25-27
  结果  27-31
  讨论  31-35
  结论二  35-36
参考文献  36-39
综述  39-48
  参考文献  45-48
主要缩略词表  48-49
攻读学位期间公开发表的论文  49-50
致谢  50-51

RNA干扰沉默细胞周期蛋白依赖激酶8基因对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响

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